可溶性CD40L在兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、研究背景和目的：特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是兒科常見(jiàn)的出血性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今尚未完全闡明。早在50年代人們就發(fā)現(xiàn)ITP患者的血液中產(chǎn)生了針對(duì)自身血小板的抗體，1951年Harrington等發(fā)現(xiàn)ITP是由一種能通過(guò)胎盤的體液因子引起，將ITP患者的血漿輸給正常個(gè)體，能使正常個(gè)體血小板減少；Shulman等隨后研究發(fā)現(xiàn)，抗血小板因子是一種免疫球蛋白；1975

2、年Dixon等首次用定量方法檢測(cè)了血小板表面的免疫球蛋白，稱為血小板相關(guān)抗體(PAIg)(Ⅱ期測(cè)定)，而該抗體與血小板膜gpⅡb/Ⅲa、gpⅠb/Ⅸ等自身抗原有交叉抗原抗體反應(yīng)，而導(dǎo)致血小板破壞增多。大量研究證實(shí)，抗血小板抗體在ITP的發(fā)病中起到關(guān)鍵的作用。 目前認(rèn)為ITP的發(fā)病機(jī)制系在一定的遺傳素質(zhì)的基礎(chǔ)上，在有關(guān)誘因的作用下使機(jī)體免疫功能紊亂，特別是T細(xì)胞活性過(guò)度增強(qiáng)，B細(xì)胞多克隆激活，產(chǎn)生抗血小板的自身抗體，使血小板在網(wǎng)狀

3、內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)破壞，從而引起血小板減少，產(chǎn)生各種臨床癥狀。免疫反應(yīng)的發(fā)生依賴于T細(xì)胞的活化，而T細(xì)胞的活化除了需要抗原-MHC復(fù)合物信號(hào)外，還需要有第二信號(hào)刺激，即抗原非特異性共刺激分子的協(xié)同。若缺乏共刺激分子，則T細(xì)胞不能被有效的激活，而進(jìn)入無(wú)反應(yīng)狀態(tài)或免疫耐受，若共刺激分子過(guò)度表達(dá)，則可激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞，導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。 近年來(lái)，隨著免疫學(xué)，分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)共刺激分子的認(rèn)識(shí)越來(lái)越深刻，其與ITP之間的關(guān)

4、系也日益引起人們的重視；其中B7家族是公認(rèn)的重要的共刺激分子，但許多研究結(jié)果顯示僅僅阻斷該途徑還不能抑制自身特發(fā)性疾病、移植排斥反應(yīng)及移植物抗宿主反應(yīng)的發(fā)生，CD40/CD40L作為另一條重要的共刺激途徑引起了人們廣泛的關(guān)注。 本研究通過(guò)測(cè)定ITP患兒外周血血漿中可溶性CD40L(sCD40L)水平，抗血小板抗體的水平及單個(gè)核細(xì)胞中sCD40LmRNA的表達(dá)水平，來(lái)探討CD40/CD40L與ITP發(fā)病機(jī)制的關(guān)系，為臨床應(yīng)用抗CD

5、40L單抗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法ITP患兒30例，其中又分為aITP和cITP，于治療前及應(yīng)用激素，丙種球蛋白治療后血小板升至正常時(shí)(血小板計(jì)數(shù)＞100×109/L)各收集外周血標(biāo)本一份。收集30例健康體檢兒童的外周血標(biāo)本作為對(duì)照組，同時(shí)記錄其發(fā)病時(shí)間、年齡、性別等臨床資料。采用ELISA法分別測(cè)出血漿中sCD40L和PAIgG的濃度，密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)定I

6、TP患兒與正常對(duì)照者sCD40LmRNA的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)分析采用兩樣本均數(shù)比較的顯著性檢驗(yàn)-t檢驗(yàn)及相關(guān)性分析，以a=0.05作為顯著性水準(zhǔn)。 結(jié)果1.ITP患兒治療前外周血sCD40L的濃度與正常人相比顯著增高(p＜0.05)，治療后ITP患兒外周血sCD40L的水平較治療前顯著降低(p＜0.05)；sCD40L的水平與臨床分型無(wú)關(guān)；若數(shù)值大于正常人的均數(shù)+2標(biāo)準(zhǔn)差視為陽(yáng)性，則sCD40L陽(yáng)性病人血小板數(shù)顯著降低，血小板抗體I