人參多糖誘導(dǎo)急性早幼粒白血病細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:通過(guò)嚴(yán)格的體外實(shí)驗(yàn),研究人參多糖(GPS)誘導(dǎo)HL-60(急性早幼粒白血病細(xì)胞株)凋亡過(guò)程中survivin caspase-3的變化。了解不同濃度人參多糖對(duì)HL-60增殖、凋亡的影響以及誘導(dǎo)HL-60凋亡的最佳濃度。期望尋找一種新藥可單用或聯(lián)合其它藥物減輕患者癥狀,提高患者生存質(zhì)量。
　　 方法:1.用含5％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人白血病細(xì)胞株HL-60于25ml的培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5％CO2、飽和濕度

2、的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2～3天傳代一次,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×103／ml的細(xì)胞懸液接種于96孔酶標(biāo)板,共設(shè)5個(gè)實(shí)驗(yàn)組(每組設(shè)3個(gè)平行空,并重復(fù)實(shí)驗(yàn)),每孔加細(xì)胞懸液50ul,以終濃度含GPS50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml各50ul為實(shí)驗(yàn)組,空白組加等量培養(yǎng)基,作用24h、48h、72h后分別用CCK-8試劑盒檢測(cè)GPS對(duì)HL-60抑制作用并計(jì)算抑制率。3

3、.將細(xì)胞濃度調(diào)整為5×102／ml的細(xì)胞懸液接種于六孔板,每孔加細(xì)胞懸液2ml,第一孔加2ml培養(yǎng)基為陰性組,其余五孔分別加入終濃度為50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml的GPS2ml為實(shí)驗(yàn)組,作用72h后酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)調(diào)亡抑制因子(Survivin)表達(dá)情況。4.將細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106／ml的細(xì)胞懸液接種于六孔板,每孔加細(xì)胞懸液1ml,第一孔加1ml培養(yǎng)基為陰性

4、組,其余五孔分別加入終濃度為50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml的GPS1ml為實(shí)驗(yàn)組,作用72h后用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)凋亡相關(guān)因子caspase-3活性。
　　 結(jié)果:1.CCK-.8結(jié)果顯示不同濃度的GPS(50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml)對(duì)HL-60都有抑制作用,而且呈時(shí)間和濃度依賴性,隨著GPS濃度增

5、加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)其抑制作用增強(qiáng)。
　　 結(jié)論:1.GPS對(duì)白血病細(xì)胞HL-60有明顯抑制增殖作用,且呈時(shí)間濃度依賴性。2.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)凋亡抑制因子(Survivin)結(jié)果顯示不同濃度的人參多糖(50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml)對(duì)調(diào)亡抑制因子(Survivin)都有抑制作用,隨著人參多糖濃度增加凋亡抑制抑制因子Survivin降低。3.caspase家

6、族是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的關(guān)鍵元件,它的激活或超常表達(dá)均引起細(xì)胞凋亡,因此又稱為死亡蛋白酶,可通過(guò)與眾多蛋白因子的相互作用調(diào)控細(xì)胞凋亡。已發(fā)現(xiàn)的14個(gè)家族成員中caspase-3是最重要的效應(yīng)型caspase。大多數(shù)觸發(fā)細(xì)胞凋亡的因素,最終都要通過(guò)caspase-3介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)結(jié)果顯示不同濃度的人參多糖(50μg／ml、100μg／ml、150μg／ml、200μg／ml、250μg／ml