常用調(diào)料、飲料及雷丸對亞洲帶絳蟲囊尾蚴體外作用的實驗研究.pdf

1、目的：亞洲帶絳蟲是一種重要的食源性寄生蟲，人感染原因是生食含有囊尾蚴的豬肝或野豬等野生動物的內(nèi)臟。本實驗在前期工作的基礎(chǔ)上，就以下幾方面展開了研究：
　　1、了解普通調(diào)料、飲料對亞洲帶絳蟲囊尾蚴存活的影響，有助于指導(dǎo)人們改變不良的飲食習(xí)慣，以預(yù)防亞洲帶絳蟲病。
　　2、了解中藥雷丸對亞洲帶絳蟲囊尾蚴體外作用后囊尾蚴的死亡率、一般組織和超微結(jié)構(gòu)形態(tài)變化以及細胞凋亡情況，初步探索中藥雷丸對亞洲帶絳蟲囊尾蚴的體外破壞作用。

2、　　3、比較中藥雷丸與常規(guī)驅(qū)絳蟲藥物吡喹酮、阿苯達唑?qū)喼迬Ы{蟲囊尾蚴體外破壞作用的異同點，有助于進一步認識傳統(tǒng)中藥雷丸對囊尾蚴病的治療作用，同時為家畜體內(nèi)囊尾蚴病的防治提供具有重要指導(dǎo)意義的基礎(chǔ)資料。
　　方法：
　　1、從貴州省都勻市和獨山縣采集帶絳蟲成蟲標(biāo)本，在觀察蟲體一般形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上，提取孕節(jié)DNA，采用亞洲帶絳蟲線粒體細胞色素C氧化酶亞單位1（Cytochrome c oxidase subunit1,cox1）

3、基因片段的特異性引物對蟲體DNA進行PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，以確定采集的蟲體為亞洲帶絳蟲。
　　2、從亞洲帶絳蟲成蟲孕節(jié)分離蟲卵，蟲卵經(jīng)酶法孵育出六鉤蚴，將活六鉤蚴按5000個/只的感染量經(jīng)皮下注射免疫抑制的昆明小鼠，感染后58～62 d剖檢小鼠，以獲取大量成熟囊尾蚴。
　　3、常溫下采用普通的調(diào)料及飲料對亞洲帶絳蟲囊尾蚴進行體外作用，并以生理鹽水作為對照組，觀測不同作用時間各組囊尾蚴的死亡率，采用確切概率計算

4、法進行統(tǒng)計分析。
　　4、采用不同濃度的雷丸粉末體外作用于亞洲帶絳蟲囊尾蚴，以吡喹酮、阿苯達唑作為陽性對照組，并設(shè)置生理鹽水陰性對照組。作用不同時間后觀測各組囊尾蚴的死亡率，采用確切概率計算法進行統(tǒng)計分析；同時對囊尾蚴進行一般形態(tài)學(xué)、組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)觀察；并用流式細胞儀檢測各組囊尾蚴細胞凋亡率，采用方差分析法進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1、采集的5條帶絳蟲呈乳白色，長2.06～2.90 m，節(jié)片數(shù)為627～873節(jié)

5、，節(jié)片較薄，頭節(jié)近方形，有4個吸盤，無頂突和小鉤，成節(jié)卵巢分2葉，孕節(jié)子宮每側(cè)分支數(shù)為18～24支。5條蟲體提取的DNA經(jīng)亞洲帶絳蟲cox1基因片段的特異性引物PCR，均擴增出260 bp的產(chǎn)物。根據(jù)一般形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，證實所采集的4條都勻絳蟲和1條獨山絳蟲均為亞洲帶絳蟲。
　　2、六鉤蚴感染免疫抑制小鼠252只，其中有119只小鼠被感染，感染率為47.22％，共獲得囊尾蚴1769個。
　　3、白酒作用1 m

6、in后囊尾蚴死亡率達到41.67%，白酒、30%食鹽水作用3 min后囊尾蚴死亡率達到75%、91.67%，食醋、蒜汁、10%食鹽水作用5 min后囊尾蚴死亡率達到66.67%、41.67%、75%，10%辣椒水作用15 min后囊尾蚴死亡率達到58.33%，10%辣椒水、姜汁作用25 min后囊尾蚴死亡率達到91.67%、83.33%，紅酒作用90 min后囊尾蚴死亡率達到41.67%，以上各組與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0

7、5）；不同調(diào)料飲料作用后囊尾蚴死亡率達到100%的時間分別為：食醋5 min、白酒5 min、30%食鹽5 min、10%食鹽10 min、醬油15 min、姜汁30 min、蒜汁10 min、10%辣椒水30 min、檸檬汁40 min、啤酒90 min、紅酒120 min，與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而鮮橙多、營養(yǎng)快線、可樂作用180 min后囊尾蚴的死亡率25%、8.33%、0%，與對照組相比均沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P

8、＞0.05）。
　　4、(1)藥物作用不同時間囊尾蚴死亡率測定：作用6 h、8 h、42 h后，陰性對照組囊尾蚴的死亡率分別為0%、0%、10%，1%雷丸組的死亡率分別為0%、0%、6.67%，5%雷丸組的死亡率分別為0%、3.33%、13.33%，上述雷丸組死亡率與陰性對照組相比均沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。20%雷丸作用6 h、8 h、42 h后囊尾蚴死亡率分別為3.33%、36.67%、70%，與陰性對照組相比，作用6

9、h后的死亡率沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），作用18 h、42 h后的死亡率有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。1%阿苯達唑作用6 h、18 h、42 h后囊尾蚴死亡率分別為13.33%、26.67%、50%,與陰性對照組相比,作用6 h后的死亡率沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），作用18 h、42 h后的死亡率有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。0.04%吡喹酮作用6 h、18 h、42 h后囊尾蚴死亡率分別為23.33%、100%、100%，與陰

10、性對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(2)藥物作用后囊尾蚴的組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn)：各組囊尾蚴先后出現(xiàn)表皮層破壞，并有脫落；皮下層局限性水腫，纖維組織疏松并有斷裂，呈泡狀。其中吡喹酮組6 h開始出現(xiàn)上述病理學(xué)變化，而雷丸組和阿苯達唑組18 h后才開始出現(xiàn)上述病理學(xué)變化。隨著藥物作用時間的延長，破壞程度逐漸加重。
　　(3)藥物作用18 h后囊尾蚴的超微結(jié)構(gòu)觀察：掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)各組囊尾蚴微毛消失，出現(xiàn)溶蝕狀孔；吡

11、喹酮組除上述超微結(jié)構(gòu)改變外，囊尾蚴表面還有大量桿狀分泌物。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)各組囊尾蚴皮層和實質(zhì)區(qū)均受破壞，破壞程度吡喹酮最重，雷丸次之，阿苯達唑最輕。但雷丸組囊尾蚴體內(nèi)的石灰小體消失，吡喹酮組囊尾蚴體內(nèi)的石灰小體形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常。
　　(4)流式細胞檢測儀檢測藥物作用不同時間囊尾蚴細胞凋亡率：藥物作用6 h后，早期細胞凋亡率：吡喹酮組(3.53±0.08%)＞20%雷丸組(2.89±0.17%)＞阿苯達唑組(2.23±0.09%)

12、；作用18 h后，早期細胞凋亡率：吡喹酮組(9.04±0.16%)＞20%雷丸組(10.44±0.07%)＞阿苯達唑組(3.04±0.23%)；作用42 h后，早期細胞凋亡率：20%雷丸組(16.12±0.11%)＞吡喹酮組(14.32±0.18%)＞阿苯達唑組(9.15±0.11%)。上述各實驗組與陰性對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、根據(jù)對采集標(biāo)本的一般形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定，提示貴州省

13、都勻市和獨山縣有亞洲帶絳蟲的分布。
　　2、常用調(diào)料中食醋和30%食鹽水對亞洲帶絳蟲囊尾蚴存活的影響最大，其次是蒜汁、10%食鹽水、醬油、姜汁和辣椒水。常用飲料中白酒對囊尾蚴的影響最明顯，其次是檸檬汁、啤酒和紅酒，但鮮橙多、營養(yǎng)快線、可樂在180 min內(nèi)仍不能完全殺滅囊尾蚴。該結(jié)果對于人們改變?nèi)粘Ｉ钪胁涣嫉娘嬍沉?xí)慣、避免亞洲帶絳蟲的感染具有一定指導(dǎo)價值。
　　3、20%雷丸、1%阿苯達唑、0.04%吡喹酮均導(dǎo)致亞洲帶絳蟲