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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:研究香青蘭總黃酮治療支氣管哮喘的藥效學(xué)及作用機(jī)理。
方法:通過(guò)磷酸組胺和氯化乙酰膽堿引喘實(shí)驗(yàn),觀察豚鼠引喘潛伏期(從噴霧開(kāi)始到哮喘發(fā)作、呼吸困難、直至抽搐跌倒的時(shí)間),研究香青蘭總黃酮的平喘作用。應(yīng)用卵蛋白(Ovialbumin,OVA)致敏并激發(fā)建立大鼠哮喘模型,并以地塞米松(1mg/kg)、香青蘭總黃酮低(80mg/kg)、中(160mg/kg)、高劑量(320mg/kg)給予灌胃,每天一次,連續(xù)30天,空白對(duì)照組給
2、予生理鹽水。末次給藥后1h,通過(guò)美國(guó)Buxco公司的整體體積描記系統(tǒng)檢測(cè)各組大鼠的肺功能及增強(qiáng)的呼吸間歇;HE染色觀察肺組織病理改變;ELISA試劑盒檢測(cè)大鼠血清中免疫球蛋白E(IgE)及支氣管肺泡灌流液(BALF)中白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)和嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子(Eotaxin-1)含量;免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)肺組織中GATA-3蛋白的表達(dá)水平;ELISA法檢測(cè)各組哮喘大鼠的肺組織中Ⅲ
3、型膠原和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的含量。研究香青蘭總黃酮治療支氣管哮喘的作用機(jī)制。
結(jié)果:1.香青蘭總黃酮中、高劑量組和陽(yáng)性藥氨茶堿組豚鼠的引喘潛伏期明顯比空白對(duì)照組有所延長(zhǎng)。
2.哮喘模型大鼠出現(xiàn)明顯的呼吸困難、流涕、抓撓等癥狀。肺組織做病理學(xué)檢查表明,香青蘭總黃酮中劑量和高劑量組在肺、支氣管及血管周?chē)馨图?xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的程度、范圍上較模型組有所減輕。
3.肺功能實(shí)驗(yàn)中模型組呼吸
4、頻率(F)相對(duì)于正常組顯著增高(P<0.01),每分種通氣量(MVb)、吸氣流量峰值(PIFb)、呼氣流量峰值(PEFb)顯著減小(P<0.05或0.01),吸氣時(shí)間(Ti)、呼氣時(shí)間(Te)沒(méi)有顯著性差異(P>0.05);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低哮喘大鼠F(P<0.05或P<0.01),升高M(jìn)VB、PIFB和PEFB(P<0.05),但對(duì)Ti、Te沒(méi)有顯著影響(P>0.05)。
4.氣道高反應(yīng)
5、性實(shí)驗(yàn):與正常對(duì)照組比較:模型組增強(qiáng)的呼吸間歇(Penh)明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組可顯著降低大鼠Penh(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中、高劑量組Penh與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
5.免疫球蛋白E(IgE)含量測(cè)定:與正常對(duì)照組比較:模型組血清IgE含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴(lài)性地降低大鼠血清IgE水平(P<
6、0.01);香青蘭總黃酮高劑量組血清IgE含量與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
6.白細(xì)胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)濃度的測(cè)定:與正常對(duì)照組比較,模型組支氣管肺泡灌流液(BALF)中IL-4濃度升高,IFN-γ濃度降低,IL-4/IFN-γ比值增大(P<0.01),與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴(lài)性地降低大鼠BALF中IL-4水平,升高IFN-γ水平,減小IL-4/IFN-γ比值(P
7、<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮高劑量組IL-4、IFN-γ濃度,IL-4/IFN-γ比值與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
7.嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子(Eotaxin-1)含量測(cè)定:與正常對(duì)照組比較,模型組BALF中Eotaxin-1含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮可劑量依賴(lài)性地降低大鼠BALF中Eotaxin-1水平(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮高劑量組Eo
8、taxin-1含量與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
8.Ⅲ型膠原(ColⅢ)含量的測(cè)定:與正常對(duì)照組比較,模型組肺組織中ColⅢ含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低肺組織中ColⅢ含量(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中劑量組ColⅢ含量與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
9.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)含量的測(cè)定
9、:與正常對(duì)照組比較,模型組肺組織中TGF-β1含量明顯升高(P<0.01);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可降低肺組織中TGF-β1含量(P<0.05或P<0.01);香青蘭總黃酮中劑量組TGF-β1含量與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
10.免疫印跡(Westernblot)法檢測(cè)肺組織GATA-3蛋白的表達(dá):與正常對(duì)照組比較,模型組肺組織GATA-3表達(dá)顯著增高(P<0.01,n=6
10、);與模型組比較,香青蘭總黃酮中、高劑量組及地塞米松組可顯著降低肺組織GATA-3表達(dá)(P<0.01,n=6);香青蘭總黃酮中、高劑量組肺組織GATA-3表達(dá)與地塞米松組比較差異沒(méi)有顯著性意義(P>0.05)。
結(jié)論:香青蘭總黃酮具有明顯的平喘作用;香青蘭總黃酮通過(guò)改善哮喘大鼠肺功能,降低Penh,從而改善哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性;抑制IgE的產(chǎn)生,從而抑制IgE所致的過(guò)敏性哮喘I型變態(tài)反應(yīng)。抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及降低哮喘大鼠Eota
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