刺激隱核蟲感染養(yǎng)殖大黃魚的LAMP檢測與分析.pdf

1、近年來，隨著大黃魚養(yǎng)殖規(guī)模日益擴(kuò)張，網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚的病害頻發(fā)，其中大黃魚“白點(diǎn)病”成為危害最為嚴(yán)重的流行性疾病之一?！鞍c(diǎn)病”病原為刺激隱核蟲（Cryptocaryon irritans），病魚大量感染該寄生蟲后，會出現(xiàn)體表、鰭條及鰓瓣布滿肉眼可見的大小白色點(diǎn)狀蟲體和包囊，活動異常、上皮增生、呼吸困難、機(jī)械損傷等病癥。本文利用分子生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建并完善了 LAMP檢測方法；采用該方法對養(yǎng)殖大黃魚海區(qū)、魚體組織等感染刺激隱核蟲跟蹤檢測，闡

2、述了2012~2013年期間，刺激隱核蟲感染養(yǎng)殖大黃魚的規(guī)律；研究了溫度、鹽度等海區(qū)水體理化因子對刺激隱核蟲感染的影響；分析了刺激隱核蟲對不同魚體組織的感染差異；為大黃魚刺激隱核蟲病的防控技術(shù)研究以及實(shí)行刺激隱核蟲病原的檢測、監(jiān)測等提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本文依賴自動循環(huán)鏈置換反應(yīng)，通過識別靶序列上4個特異區(qū)域的引物和具有鏈置換的DNA聚合酶，在 Mg2+濃度為2 mmol-1、反應(yīng)溫度61℃~66℃，內(nèi)外引物濃度2:1~

3、6:1、反應(yīng)時間60min的優(yōu)化條件下，擴(kuò)增出呈特異性 LAMP梯形條帶產(chǎn)物，構(gòu)建完善了 LAMP檢測方法。該檢測方法操作簡便、高度靈敏、準(zhǔn)確性高、實(shí)用性強(qiáng)，既能檢出未發(fā)病但已感染的病魚，又能檢測發(fā)病魚，為快速檢測刺激隱核蟲提供新方法。
　　研究養(yǎng)殖海區(qū)水溫對刺激隱核蟲感染大黃魚影響：春夏（5月份下旬~7月份上旬）和夏秋（8月份下旬~10月份上旬）是刺激隱核蟲感染大黃魚的高峰期，水溫成為影響刺激隱核蟲病發(fā)生的最主要水質(zhì)因子之一，水

4、溫的變化直接影響大黃魚感染率，通過水溫的監(jiān)測可對刺激隱核蟲病預(yù)警預(yù)防。
　　研究養(yǎng)殖海區(qū)鹽度對刺激隱核蟲感染大黃魚影響：養(yǎng)殖海區(qū)2012~2013年鹽度波動范圍為：20‰~30‰之間，此區(qū)間在刺激隱核蟲耐受限度范圍內(nèi)，較適宜刺激隱核蟲的生長、發(fā)育、繁殖和生活。
　　研究刺激隱核蟲對魚體不同組織的感染差異：當(dāng)大黃魚受到刺激隱核蟲感染時，其鰓組織最先受到感染，且會迅速大量繁殖，短時間內(nèi)，鰓組織就將嚴(yán)重受到破壞，并呼吸困難，最終死