西唐氏鏈霉菌Z-L-22活性物質(zhì)的分離提純及理化性質(zhì)初探.pdf

1、番茄潰瘍病(Bacteria Canker of Tomato)是由密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種(Clavibacter michiganensis subp．michiganensis，Cmm)引起的一種重要的細(xì)菌病害，每年造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，目前還沒有安全有效的防治措施。本實(shí)驗(yàn)室從番茄植株根際土中篩選出一株對番茄潰瘍病菌有強(qiáng)烈頡頏作用的鏈霉菌，通過生物學(xué)鑒定和分子檢測把其確定為西唐氏鏈霉菌(S．setonii)。本實(shí)驗(yàn)主要從西唐氏鏈霉菌Z

2、-L-22發(fā)酵抑菌活性物質(zhì)的穩(wěn)定性、理化性質(zhì)、分離提純方法等幾個方面進(jìn)行研究。 在分離提純之前，首先對其進(jìn)行預(yù)處理，結(jié)果表明經(jīng)過草酸處理的發(fā)酵抑菌活性物質(zhì)會有少量損失，但能提高發(fā)酵液萃取分離效率。用HCl和NaOH調(diào)無菌發(fā)酵上清液的pH值，并在室溫處理24h，60℃、90℃溫度條件下處理1h，結(jié)果表明抑菌活性物質(zhì)的在強(qiáng)酸和中性條件下比較穩(wěn)定，強(qiáng)堿條件下穩(wěn)定性降低，并且溫度升高會使其在酸堿中的穩(wěn)定性降低；經(jīng)過不同的溫度處理，120

3、℃處理12h其抑菌圈直徑依然能達(dá)到21.4mm，說明該活性物質(zhì)的高溫穩(wěn)定性比較高；抑菌活性物質(zhì)的紫外線和日光穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明它對紫外線和日光有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。 用捷克八溶劑系統(tǒng)紙層析和pH紙層析法對西唐氏鏈霉菌Z-L-22的抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)在捷克八溶劑系統(tǒng)中的Rf值都在0.9以上，與經(jīng)典的抗生素素色譜圖對比發(fā)現(xiàn)其與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的色譜圖類似；在不同的pH條件下抑菌活性物質(zhì)紙層析的Rf值相近，都接近溶劑前沿，這與中

4、性抗生素的pH紙層析的色譜圖相似，綜上所述把西唐氏鏈霉菌Z-L-22的發(fā)酵活性物質(zhì)初步確定為中性的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。 用不同的展開劑對發(fā)酵粗提物進(jìn)行TLC分析，發(fā)現(xiàn)苯：乙酸乙酯：甲醇=19：19：4為最佳展開劑，能把發(fā)酵粗提物分為8個組分，通過TLC制備各個組分并對其進(jìn)行抑菌生物活性測定，發(fā)現(xiàn)其中的四個具有抑菌生物活性，為別為Ⅰ(Rf=0.96)、Ⅱ(Rf=0.64)、Ⅲ(Rf=0.56)、Ⅳ(Rf=0.5)。對乙酸乙酯發(fā)酵液萃

5、取和丙酮菌絲浸提粗提物進(jìn)行HPLC分析，發(fā)現(xiàn)兩者的組分相同，只是組分的含量不同。TLC分離的組分Ⅱ的純度為85.58％，組分Ⅲ的純度為78.65％。用非極性大孔吸附樹脂吸附發(fā)酵粗提物中的活性物質(zhì)，用40％、70％、90％的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫組分的HPLC分析表明70％乙醇洗脫得到一個純度為50.05％的活性組分，90％洗脫得到一個純度為66.08％的活性組分。最后用半制備HPLC對發(fā)酵粗提物進(jìn)行分離提純，得到純度在組分97％以上