HIF-2在HPPCn促進(jìn)腎癌細(xì)胞生長遷移中所起的作用研究.pdf

1、目的意義:
　　HPPCn(Hepatopoietin Cn)是在我們實驗室一種新發(fā)現(xiàn)的再生肝臟的細(xì)胞生長因子，哺乳動物為其主要來源，在多種組織中廣泛表達(dá)。作為一類多功能的核蛋白，它可以表達(dá)于腫瘤組織中，同時也表達(dá)于自我具有更新能力的細(xì)胞中和正常組織中，同時在很多方面發(fā)揮了重要的作用，其中包括在蛋白質(zhì)的降解、細(xì)胞骨架動力學(xué)、細(xì)胞之間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、和細(xì)胞的形態(tài)變化方面和其他許多生物過程。
　　在CRCC細(xì)胞中HIF-1α和HIF

2、-2α的轉(zhuǎn)錄靶基因并不完全相同，并清楚定義了HIF-1α和HIF-2α的特異靶基因。多種癌基因如CyclinD1、TGF-α、VEGF等是HIF-2α的特異靶基因，而促凋亡基因BNIP3是HIF-1α的特異靶基因。而且HIF-1α和HIF-2α與不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路交聯(lián)。激活的HIF-1α能夠降低c-Myc依賴的細(xì)胞增殖，而HIF-2α則與之相反。除此以外，HIF-1α比HIF-2α對VHL缺失CRCC細(xì)胞中蛋白酶體的降解更敏感。CRCC

3、的多血管特征常與HIF-2α上調(diào)密切相關(guān)，而CRCC中高表達(dá)HIF-1α患者的生存期要長于其他類型患者。因此，HIF，特別是HIF-2α可能在CRCC發(fā)展中發(fā)揮了更為重要的作用
　　近年來的研究發(fā)現(xiàn)HPPCn的表達(dá)和活性與腫瘤的生長與預(yù)后密切相關(guān)。HPPCn能夠抑制多種化療藥物(Sorafinib，ADM，CDD，TSA)誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡，并經(jīng)過調(diào)控mRNA的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，促進(jìn)腫瘤的

4、轉(zhuǎn)移和浸潤。轉(zhuǎn)基因小鼠的肝癌誘發(fā)實驗顯示HPPCn能夠在誘導(dǎo)早期增加原癌基因c-myc的表達(dá)，并顯著增加腫瘤的肺轉(zhuǎn)移率。肝癌細(xì)胞尾靜脈注射實驗顯示HPPCn高表達(dá)能夠增加肝癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移和腫瘤中血管的數(shù)量。同時，初步的研究還發(fā)現(xiàn)HPPCn在腎臟透明細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常腎臟組織。并且發(fā)現(xiàn)HPPCn可促進(jìn)HIF-2的表達(dá)。那么，腎臟透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中與HPPCn之間會有著什么樣的關(guān)系呢？HIF-2又在這之中是否有作

5、用？
　　圍繞上述問題，本實驗?zāi)康氖茄芯縃PPCn調(diào)控HIF-2a促進(jìn)腎癌細(xì)胞生長轉(zhuǎn)移的作用和機制。為此做了如下的研究工作。
　　方法:
　　構(gòu)建干涉HIF-2的慢病毒載體，應(yīng)用Western blot和Q-PCR檢測HIF-2的干涉效率。再通過干涉腫瘤細(xì)胞的HIF-2表達(dá)，應(yīng)用MTS，劃痕實驗、Transwell實驗驗證HIF-2在HPPCn調(diào)控腎癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　結(jié)果:
　　我們通過慢病毒載

6、體構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建了PLKO.1-shHIF-2，并將其包裝成慢病毒，它可以有效的干涉細(xì)胞內(nèi)的HIF-2的表達(dá)，干涉效率在蛋白質(zhì)水平和mRNA水平上均大于80％，病毒感染細(xì)胞后經(jīng)過克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得了穩(wěn)定干涉HIF-2的786-0細(xì)胞，慢病毒的獲取和穩(wěn)定細(xì)胞的篩選為下一步闡述HPPCn在腎臟透明細(xì)胞癌中的作用奠定了基石出。
　　隨后，我們驗證了HPPCn蛋白通過對腎臟透明細(xì)胞癌中HIF-2的調(diào)控進(jìn)而影響腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞生物特性。我們用