Rap2信號(hào)通路調(diào)控腎癌細(xì)胞遷移及侵襲的機(jī)制.pdf

1、Rap2屬于Ras家族Rap亞族，具有Rap2A、Rap2B和Rap2C三種異構(gòu)體，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生命活動(dòng)。由于Rap2與Ras家族其他成員具有相似的結(jié)構(gòu)，因此Rap2能夠結(jié)合多種Ras家族共有的相互作用蛋白，另外Rap2還可能通過與特異性相互作用蛋白的結(jié)合的方式完成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前已知的人源Rap2相互作用蛋白有PARG、TNIK、MINK和MAP4K4四種，但是對(duì)其在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的機(jī)制尚無闡述。
　　本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)活性化

2、Rap2在腎癌組織中的水平遠(yuǎn)高于癌旁正常組織，且Rap2的高表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移，然而其分子機(jī)制都尚待闡明。本文首先通過GST-Pull down檢測(cè)了腎癌細(xì)胞系中Rap2的活性化水平，并通過半定量PCR檢測(cè)了對(duì)Rap2活性具有調(diào)控作用的Rap1GAP1和RasGEF1B在不同腎癌細(xì)胞系的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腎癌細(xì)胞系中Rap2的活性化水平與上述調(diào)控因子的差異表達(dá)相關(guān)。為了研究Rap2調(diào)控細(xì)胞侵襲和遷移的作用通路，通過劃痕實(shí)驗(yàn)和T

3、ranswell實(shí)驗(yàn)對(duì)具有高活性化水平Rap2的腎癌細(xì)胞系進(jìn)行了針對(duì)TNIK和MAP4K4的RNA干擾和遷移及侵襲分析，結(jié)果顯示：Rap2通過TNIK和MAP4K4促進(jìn)腎癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力。已有研究報(bào)道FAK正調(diào)控細(xì)胞的鋪展和運(yùn)動(dòng)，本文通過免疫熒光和western blot的實(shí)驗(yàn)證明Rap2及其激活突變體的過表達(dá)可上調(diào)FAK的表達(dá)，而DN突變體Rap2-17N則對(duì)FAK表達(dá)無顯著調(diào)控作用。本研究增進(jìn)了對(duì)于Rap2在腎癌細(xì)胞系中高活性