葡萄（霞多麗）漿果中糖苷酶分布的研究.pdf

1、β-葡萄糖苷酶是分解和釋放葡萄汁和葡萄酒中無(wú)香氣的香氣前體物的關(guān)鍵酶類。本文探索優(yōu)化了霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶的粗酶液制備方法，還建立了以 p-NPG為底物的比色法測(cè)定霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶酶活性檢測(cè)方法，并且檢測(cè)了霞多麗葡萄果皮、果肉、果梗和種子中的β-葡萄糖苷酶分布。為從葡萄中提取葡萄糖苷酶和對(duì)葡萄酒的香氣研究提出一定的理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)，并對(duì)葡萄酒的釀造工藝的優(yōu)化和完善提出科學(xué)建議。本試驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下： 1．

2、霞多麗漿果中β-葡萄糖菅酶的酶粗提液制備方法試驗(yàn)探索了霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶酶粗提液的制備方法。通過(guò)對(duì)冰浴和液氮研磨破碎葡萄材料，制備酶粗提液比較得出結(jié)論，制備粗酶液過(guò)程中采用冰浴破碎會(huì)使β-葡萄糖苷酶部分或者完全失活，檢測(cè)不到酶活或者酶活檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，而液氮研磨破碎葡萄材料，制備酶粗提液，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)采用液氮研磨制各酶粗提液。 2．霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶活性分析條件的建立。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)β-葡萄

3、糖苷酶活性測(cè)定方法電化法、熒光法、分光光度法等的比較研究，采用了以對(duì)硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)為酶反應(yīng)底物的比色法檢測(cè)霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶活性。以霞多麗漿果為材料，對(duì)β-葡萄糖苷酶活性分析條件進(jìn)行的研究結(jié)果表明，PVP加入量對(duì)酶活性影響較大，當(dāng)PVP加入量在0～4％范圍里，隨著PVP加入量的增大，酶活性呈上升的趨勢(shì)，當(dāng)PVP加入量達(dá)到4％時(shí)，酶活性變化不再明顯，同時(shí)酶反應(yīng)液澄清度不好，實(shí)驗(yàn)選擇PVP加入量為3％

4、；緩沖液類型及pH值對(duì)酶活性也有較大影響。隨著pH值的增大，酶活性均呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì)，當(dāng)pH為6.0時(shí)酶活性達(dá)到最大值。在相同pH條件下，檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液提取和反應(yīng)的酶活性最大。酶的吸收波長(zhǎng)分析結(jié)果表明，在波長(zhǎng)在400～410 nm范圍里β-葡萄糖苷酶的反應(yīng)生活物對(duì)-硝基苯酚能獲得最大的光吸收值，試驗(yàn)選擇405 nm 為試驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)。酶促反應(yīng)以37℃為宜，在此條件下反應(yīng)120 min內(nèi)酶活性分析結(jié)果最穩(wěn)定。據(jù)此和正交實(shí)驗(yàn)分析得

5、出霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶提取測(cè)定條件為酶促反應(yīng)溫度為37℃，反應(yīng)時(shí)間為 90 min,β-葡萄糖苷酶提取和反應(yīng)最適緩沖液及pH是檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液，pH 6.0，檢測(cè)波長(zhǎng)為405 nm。 3．霞多麗漿果不同部位的。β-葡萄糖苷酶活性分布。 實(shí)驗(yàn)采用以對(duì)硝基苯基-β-Dβ吡喃葡萄糖苷(p-NPG)為酶反應(yīng)底物的比色法檢測(cè)霞多麗漿果不同部位的β-葡萄船苷酶活性，按照以上所得的活性分析條件鹼測(cè)酶活性。結(jié)果顯示，得到霞

6、多麗成熟種子的β-葡萄糖苷酶活性高于果皮、果肉，而果皮果肉的活性又高于果梗，其果實(shí)不同部位的β-葡萄糖苷酶活性差異極顯著，霞多麗漿果中果皮部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是9.2476(U/gFW)±0.5072，霞多麗漿果果肉部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是8.6586(U/gFw)±1.3703，霞多麗漿果果梗部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是2.6035(U/gFW)±0.3489,霞多麗漿果