刺參高溫脅迫相關蛋白的識別與鑒定研究.pdf

1、刺參(Apostichopus japonicus)又稱仿刺參，屬于棘皮動物門、海參綱，是一種高蛋白、低糖、低脂肪、無膽固醇的重要的養(yǎng)殖經濟水產動物，具有巨大的經濟和藥用價值。溫度是影響刺參生長、發(fā)育、繁殖的最主要環(huán)境因子之一，當海水溫度升高到一定范圍（20-25℃）后，成體刺參攝食停止、活動降低、消化道退化、體質量減輕、代謝降低、能量利用對策改變，進入夏眠。因此，開展高溫脅迫條件下刺參差異表達蛋白的的研究對刺參養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展具有重要

2、的實踐意義。
　　本研究采用比較蛋白質組學方法，對適宜生長條件（16℃）和高溫脅迫下（25℃）刺參血細胞中差異表達蛋白進行了研究，并運用實時定量PCR對部分差異表達的蛋白在mRNA表達水平上進行了進一步的評估。結果如下：
　　（1）成功建立了一具有高分辨率和良好重復性的刺參血細胞雙向電泳體系。利用該體系，對適宜生長條件和高溫脅迫下飼養(yǎng)7天的刺參的血細胞全蛋白進行了分離。使用PDQuest8.0軟件對二維凝膠電泳圖譜進行生物信

3、息學分析，約500個蛋白質點被檢測到；表達量差異1.5倍以上且重復性較好的的蛋白點27個，最大表達差異比率為5.62。運用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜技術結合 Mascot數據庫對27個顯著差異的蛋白點進行了鑒定及特征分析，共有23個蛋白質點得到成功注釋。其中上調表達的蛋白主要有 Hsp60、蛋白二硫鍵異構酶、卵黃蛋白、ATP合酶、鈣網蛋白、以及微管蛋白和肌動蛋白等，而下調表達的蛋白主要有鐵蛋白、鈣調蛋白、親環(huán)素、酚羥化酶組分等。G