沉默ADAM10基因后Hela細胞生物學(xué)活性的改變及其可能作用機制的研究.pdf

1、本實驗研究課題以人宮頸癌細胞株Hela為研究載體,將ADAM10干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進入Hela細胞中,通過篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Hela細胞ADAM10基因沉默細胞系,從而研究Hela細胞ADAM10基因沉默前后細胞活性的改變。
　　目的:通過研究ADAM10基因沉默前后的Hela細胞活性的改變,找出ADAM10基因引起腫瘤細胞增殖,遷移的作用靶點與可能作用機制,為進一步的以ADAM10為核心的腫瘤治療提供更多可靠依據(jù)。
　　方法:制

2、備可供轉(zhuǎn)染的高純度環(huán)狀干擾質(zhì)粒;熒光顯微鏡觀測轉(zhuǎn)染效率;Real-time PCR檢測ADAM10基因表達;Western blotting檢測ADAM10蛋白表達水平;MTT法比較沉默前后Hela細胞增殖的變化;Transwell細胞侵襲實驗;流式細胞計數(shù)法檢測細胞周期變化;Real-time PCR檢測CD44、CD44v6、CyclinA1;CyclinD1;Western blotting檢測ERK、P-ERK。
　　結(jié)果

3、:轉(zhuǎn)染后得到ADAM10沉默細胞系,幾乎不表達ADAM10蛋白;MTT法顯示沉默前后細胞增殖有顯著性差異;Transwell實驗結(jié)果顯示沉默前后細胞侵襲有顯著性差異;流式細胞計數(shù)顯示沉默ADAM10基因后Hela細胞發(fā)生G1期阻滯;沉默ADAM10基因后CD44基因表達無顯著性差異,CD44v6基因表達下調(diào),CyclinA1無顯著性變化,CyclinD1表達下調(diào);沉默ADAM10基因后Western blotting顯示ERK表達無顯著

4、性差異,P-ERK表達下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.Hela細胞中ADAM10蛋白表達水平可以影響CD44v6的基因表達
　　2.沉默ADAM10基因后細胞的侵襲性顯著性降低,可能是通過 ADAM10蛋白表達水平影響CD44v6的基因表達。
　　3.沉默ADAM10基因后Hela細胞出現(xiàn)G1期阻滯,細胞增殖速率降低
　　4.沉默ADAM10基因后Hela細胞出現(xiàn)G1期阻滯,其機制可能與ADAM10調(diào)節(jié)細胞信號