大腸桿菌偏嗜性人γ干擾素基因編碼序列的克隆與表達(dá).pdf

1、　　γ干擾素(Interferon-γ，IFN-γ)又稱免疫干擾素(Immuneinterferon)，是由淋巴細(xì)胞分泌的一類功能調(diào)節(jié)蛋白。除具有抗病毒、抗腫瘤的作用外，它還是人體內(nèi)一種雙向免疫調(diào)節(jié)因子，在治療自身免疫性疾病方面有廣闊的應(yīng)用前景。天然人γ干擾素(hIFN-γ)來源有限、產(chǎn)量甚微，不能滿足科研和臨床應(yīng)用的需要。因此，利用基因工程方法獲得高表達(dá)的重組人γ干擾素(rhIFN-γ)成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。本文依據(jù)遺傳密碼具有簡

2、并性的特點(diǎn)，在不改變氨基酸順序的條件下，用大腸桿菌基因序列中使用頻率高的強(qiáng)密碼子取代hIFN-γ基因編碼序列中的弱密碼子，并將修改后的編碼序列分為六段，進(jìn)行人工化學(xué)合成。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的基因后，將其克隆到表達(dá)載體pBV220上，進(jìn)而轉(zhuǎn)化入E.coliJM109中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE和WesternBlotting檢測證實(shí)，表達(dá)產(chǎn)物的分子量約為18KD，與預(yù)期相符。通過優(yōu)化表達(dá)條件，可提高目的蛋白表達(dá)產(chǎn)量，使其占菌體總