牛血清白蛋白-高分子結合體的制備及在腫瘤診療中的應用.pdf

1、近年來，血清白蛋白作為一種新型的生物材料，因其良好的生物相容性、精確的幾何結構，且易于功能化，在納米醫(yī)藥領域受到越來越多的關注。本文選用牛血清白蛋白(BSA)作為基材，從分子設計角度，制備出一種新型的蛋白質-高分子結合體，并對其自組裝行為及在癌癥化療、核素治療和熒光成像中的應用進行了研究。具體研究內(nèi)容如下：
　?。?）雙親性BSA-聚己內(nèi)酯(PCL)結合體的合成與結構性能表征。本文通過開環(huán)聚合(ROP)，合成了端基馬來酰亞胺化的P

2、CL，并利用馬來酰亞胺與BSA的自由巰基之間的邁克爾加成反應，制備出新型BSA-PCL結合體。通過核磁共振儀、基質輔助激光解吸附串聯(lián)時間飛行質譜儀(MALDI-TOF MS)和SDS-PAGE凝膠電泳等對合成產(chǎn)物進行表征，并利用透射電子顯微鏡(TEM)和動態(tài)光散射(DLS)等進一步研究了該結合體的組裝性能。結果顯示，BSA-PCL結合體被成功制備，且具有雙親性，在水中可以組裝得到不同形貌的納米組裝體。
　?。?）基于BSA-PCL

3、結合體的納米靶向藥物載體的構建。利用制備的雙親性BSA-PCL結合體，通過自組裝技術，構建了包載抗癌藥物阿霉素的納米高分子脂質體，并利用表面含有的功能基團，對高分子脂質體進行表面靶向修飾。采用U251細胞和MAD-MB-231細胞對構建的納米載體的細胞內(nèi)吞和細胞毒性進行了評估。結果表明，相比于未修飾的高分子脂質體，經(jīng)西妥昔單抗修飾的高分子脂質體具有更好的進胞效果。MTT結果表明，制備的BSA-PCL結合體具有很低的細胞毒性和較好的生物相

4、容性。包載抗癌藥物阿霉素后，西妥昔單抗修飾的載藥BSA-PCL結合體納米粒子對兩種腫瘤細胞的生長都具有明顯的抑制效果。
　?。?）基于BSA-PCL結合體的核素靶向納米載體的構建。利用BSA含有的酪氨酸作為位點，在BSA-PCL結合體制備的納米組裝體上標記放射性131I，并對納米載體進行靶向修飾，提高放射性131I標記的納米粒子對細胞的靶向性。采用γ計數(shù)器和MTT實驗對構建的核素靶向納米載體的進胞效果和腫瘤抑制生長效果進行了表征。

5、結果顯示，相比于游離的131I離子，構建的核素靶向納米載體增加了放射性131I被腫瘤細胞的攝取量，延長了放射性131I在腫瘤細胞內(nèi)的存留時間，提高了對腫瘤細胞的放射性殺傷效果。
　?。?）基于BSA-PCL結合體的近紅外熒光納米探針的構建。利用雙親性BSA-PCL結合體對疏水性近紅外CuInS2/ZnS量子點進行表面改性，制備出新型的近紅外熒光納米探針。利用TEM、DLS、熒光分光光度計和紫外分光光度計對構建的納米探針的形貌、粒徑

6、和熒光性能進行了表征。該納米探針具有優(yōu)異的熒光性能和膠體穩(wěn)定性，同時由于最外層BSA的保護，有效地降低了納米探針的非特異性吸附，并賦予納米探針良好的生物相容性。將靶向制劑cRGD修飾到納米探針的表面，有效增加了納米探針對αvβ3整合素過表達的腫瘤細胞的靶向性。此外，在裸鼠體內(nèi)初步驗證了該納米探針在體內(nèi)成像的可行性。以上結果為進一步構建體內(nèi)靶向的近紅外熒光納米探針打下了基礎。
　?。?） pH響應性 BSA-聚甲基丙烯酸二異丙基氨基

7、乙酯(PDPA)結合體的制備。將刺激響應性高分子連接到蛋白質上，可賦予蛋白質-高分子結合體敏感性。本文首先設計合成一種ATRP小分子引發(fā)劑，通過ATRP聚合，制備端基馬來酰亞胺化的pH敏感高分子PDPA。利用BSA中的巰基，將PDPA連接到BSA上，制備了BSA-PDPA結合體。利用SDS-PAGE凝膠電泳對結合體進行分子量表征，證明PDPA被成功結合到BSA上。通過ZetaPALS電位分析儀測定BSA-PDPA結合體在不同pH值溶液中