糖尿病視網(wǎng)膜病變患者纖維血管膜中SIRT1的表達(dá)及其相關(guān)機(jī)制初步研究.pdf

1、[目的]糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy,DR)是常見的糖尿病微血管并發(fā)癥，為發(fā)達(dá)國(guó)家工作年齡人群中致盲率最高的疾病。SIRT1屬于第Ⅲ型組蛋白去乙?；?，與DR發(fā)病相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的目的為初步探討SIRT1在DR纖維血管膜形成中的作用，研究SIRT1激動(dòng)劑白藜蘆醇是否對(duì)高糖培養(yǎng)的RPE細(xì)胞具有保護(hù)效應(yīng)，及其相關(guān)機(jī)制。同時(shí)初步研究與白藜蘆醇結(jié)構(gòu)相近的二苯乙烯苷是否具有類似作用。
　　[方法]采集DR伴眼底纖維

2、血管膜患者、非糖尿病伴特發(fā)性黃斑前膜患者眼部標(biāo)本，石蠟包埋切片，行免疫組化檢測(cè)兩組患者SIRT1表達(dá)的差異。體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，加入5.5mmol/L葡萄糖，5.5mmol/L葡萄糖加上甘露醇，25mmol/L葡萄糖，25mmol/L葡萄糖及不同濃度白藜蘆醇、二苯乙烯苷，分別檢測(cè)以下指標(biāo)的變化情況:
　　(1)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力;
　　(2)RT-PCR檢測(cè)SIRT1、PGC-1α基因表達(dá)水平;
　　(

3、3)Western blot檢測(cè)乙?；疦F-κBp65含量及AMPK活性;
　　(4)ELISA法檢測(cè)VEGF分泌量。
　　[結(jié)果]共收集DR患者纖維血管膜12例，非糖尿病患者黃斑前膜7例，纖維血管膜中SIRT1陽性率高于黃斑前膜組織(100％vs28.6％)，去掉年齡因素影響后，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.021)。25mmol/L葡萄糖能降低人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞活力、抑制SIRT1及PGC-1α轉(zhuǎn)錄，激活NF-κB、抑制

4、AMPK活性，促進(jìn)VEGF分泌。加入一定濃度的白藜蘆醇或二苯乙烯苷，可抑制高糖引起的細(xì)胞活力下降，減少SIRT1轉(zhuǎn)錄下降的水平，減少NF-κB的激活，VEGF分泌量也相應(yīng)降低。同時(shí)，一定濃度的白藜蘆醇及二苯乙烯苷可以減少高糖對(duì)PGC-1α轉(zhuǎn)錄的抑制作用，其幅度與對(duì)應(yīng)的SIRT1、NF-κB改變水平并不完全一致，但與AMPK的活性變化量基本一致。
　　[結(jié)論]DR患者纖維血管膜中SIRT1表達(dá)升高，提示SIRT1與DR新生血管有一定