信號轉導及轉錄活化因子5對肺癌診斷價值的實驗研究.pdf

1、目的:為了檢測信號轉導和轉錄激活因子5(signal transducer and activator of transcription5,STAT5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、細胞角蛋白19片段(Cytokeratin19 fragment,Cyfra21-1)三者分別在正常人胚肺MRC-5細胞和人肺腺癌A549細胞中的表達情況,并使用受度者工作特征曲線(ROC曲線),探索STAT5能否可

2、以對肺癌早期診斷具有重要價值。方法:1.采用免疫細胞化學SP法檢測傳代培養(yǎng)的正常人胚肺MRC-5細胞和人肺腺癌A549細胞中STAT5、CEA、Cyfra21-1蛋白表達的表達。用Olympus BX60帶照相系統(tǒng)顯微鏡采集圖片,使用IPP(Image-Pro Plus)6.0圖像分析軟件分析所采集的圖片,通過計算機所測圖片MOD(mean optical density,平均光密度)值判斷圖片染色強度,得到相應的量化值;2.利用熒光定

3、量PCR方法檢測在正常人胚肺MRC-5細胞和人肺腺癌A549細胞中STAT5 mRNA、CEA mRNA、Cyfra21-1 mRNA的基因表達量。通過利用ROC曲線分析在人肺腺癌A549細胞中STAT5、CEA、Cyfra21-1的蛋白及mRNA表達情況,利用曲線下面積比較三者單檢與聯(lián)合檢測的診斷價值。結果:1.免疫細胞化學染色圖片分析結果:(l)STAT5蛋白、CEA蛋白和Cyfra21-1蛋白在正常人胚肺MRC-5細胞中的表達均明

4、顯低于它們各自在人肺腺癌A549細胞中的表達,經(jīng)統(tǒng)計學軟件分析計算,它們各自在兩組細胞中的表達水平差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(2)在A549細胞中分別計算STAT5、CEA、Cyfra21-1蛋白的ROC曲線下面積(Az)分別為0.766、0.771、0.749。三者的曲線下面積(Az)分別比較,三者之間差異均不具有統(tǒng)計學意義(P﹥0.05)。2.熒光定量PCR方法檢測結果顯示:(1)STAT5、CEA、Cyfra21-1和

5、β-actin擴增之后各自的產物特異都達到較高水平;擴增效率分別為97.96％、96.77％、95.19％、97.73％。(2)STAT5 mRNA、CEA mRNA、Cyfra21-1 mRNA在正常人胚肺MRC-5細胞中的基因表達水平均明顯低于它們各自在人肺腺癌A549細胞中的表達,經(jīng)統(tǒng)計學軟件分析之后,它們各自分別在兩組細胞株中的表達差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)分別計算STAT5mRNA、CEAmRNA、Cyfra

6、21-1 mRNA的ROC曲線下面積(Az)分別為0.807、0.732、0.721,三者的曲線下面積(Az)分別比較,三者之間差異均不具有統(tǒng)計學意義。(4)計算STAT5 mRNA和STAT5蛋白的ROC曲線下面積(Az)分別為0.807,0.766,兩者之間的曲線下面積(Az)比較,Z=0.010,P=0.500﹥0.05,差異不具有統(tǒng)計學意義,推測兩者對肺癌診斷價值無明顯差異。3.STAT5+CEA+Cyfra21-1三項聯(lián)合檢測

7、的ROC曲線下面積(Az)為0.913,而CEA+Cyfra21-1兩項聯(lián)合檢測的曲線下面積(Az)為0.833;兩種腫瘤標志物聯(lián)檢方法的曲線下面積(Az)比較,Z=2.583,P=0.005﹤0.05,差異有統(tǒng)計學意義。結論:(1)STAT5、CEA、Cyfra21-1的蛋白和mRNA在正常人胚肺MRC-5細胞中的表達均明顯低于它們各自在人肺腺癌 A549細胞中的表達。(2)STAT5與目前臨床上常使用的肺癌標志物CEA、Cyfra2