復(fù)發(fā)性涎腺腺樣囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物學(xué)特性.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文復(fù)發(fā)性涎腺腺樣囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物學(xué)特性姓名：侯亞麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王潔20050301中文摘要Balb。裸小鼠，45周齡。2方法:(1)標(biāo)本的處理:在無菌條件下，切取標(biāo)本，立即置于含1000Uml青霉素、500ggml鏈霉素的培養(yǎng)液中30分鐘。在無菌條件下，去除周圍正常組織及壞死的腫瘤組織、血塊及包膜，剪成1mm3左右大小的組織塊，放于新鮮培養(yǎng)液中備用。(2)動(dòng)物麻醉

2、:腹腔內(nèi)注射0.28%的戊巴比妥鈉溶液0.20.3m1只。(3)接種過程:麻藥注射數(shù)分鐘后，麻藥顯效，切開裸鼠右前和左后背部皮膚，用眼科鑷將剪好的1m左右大小的腫瘤組織塊置入皮下，50的可吸收線縫合。(4)移植瘤傳代:待裸鼠體內(nèi)移植瘤直徑生長(zhǎng)至5mm左右時(shí)，將裸鼠斷頸處死，無菌剝離瘤體，按原代瘤移植法進(jìn)行下一代裸鼠接種、傳代。并同時(shí)留取移植瘤標(biāo)本進(jìn)行鑒定。(5)組織學(xué)觀察:來自患者的復(fù)發(fā)性腫瘤和各代移植瘤標(biāo)本分別經(jīng)10%福爾馬林固定后，

3、石蠟包埋，切片厚度S[IM，行HE染色，多功能顯微鏡AX80下觀察拍照。(6)免疫組織化學(xué):切片脫蠟入水后，正常山羊血清孵育，單克隆鼠抗人低分子量角蛋白(CK8)和單克隆鼠抗人平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)1:50，二抗和ABC各為1:100DAB顯色，透明封固，多功能顯微鏡AX80下觀察拍照。(7)細(xì)胞培養(yǎng):取第3代的移植瘤組織塊，剪碎置于培養(yǎng)瓶中，RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)數(shù)周。待腫瘤細(xì)胞爬出，貼壁，收集呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的瘤細(xì)胞，進(jìn)行染色體