光動力學治療惡性黑素瘤的初步研究.pdf

1、目的：光動力學療法(Photodynamictherapy，PDT)是光動力反應應用于臨床的一種特殊類型治療方法，是一種新的兩步法治療手段。即首先給予一種主要定位于腫瘤的光敏藥物，或通過應用前體藥物如5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinicacid，5-ALA)及其衍生物產生內源性光敏劑，再利用特定波長的光源激活光敏劑使其由基態(tài)變成激發(fā)態(tài)，通過一系列的光化學反應產生大量的活性氧(主要是單線態(tài)氧)，導致腫瘤組織的不可逆損傷。目前，

2、國內外學者將光動力學療法應用于腫瘤的治療做了大量的工作。但是，用光動力學療法來治療惡性黑素瘤國外只有少量報道。本研究使用光敏劑二氫卟吩e6(chlorine6，Ce6)和5-氨基酮戊酸在體外和活體內的作用于惡性黑素瘤A-375細胞株觀察二者對惡性黑素瘤光動力學作用和效果。為進一步光動力學治療應用于臨床提供實驗依據。 方法：(1)體外實驗將體外培養(yǎng)的人黑素瘤A-375細胞分別加入不同濃度的光敏劑Ce6(0、2、4、7.5、15、3

3、0、60μmol/L)或光敏劑前體物5-ALA(0、0.5、1、1.5、2mmol/L)后，加入Ce6的細胞組避光孵育12h，加入5-ALA的細胞組避光孵育6h,予波長652nm半導體激光照射，照射的功率密度為15.6mW/cm2，照射劑量分別為(0、2、5、10、20J/cm2)，繼續(xù)孵育12h后，MTT法測定細胞存活率。(2)活體內實驗用培養(yǎng)好的惡性黑素瘤細胞株，皮下接種至裸鼠右側后肢腹股溝，接種的細胞數按照2×106個/只進行接種

4、，接種成功后荷瘤裸鼠隨機分為4組(對照組，5-ALA-PDT組，Ce6-PDT組，聯合治療組)，每組6只。實驗過程中，對照組不進行PDT，只進行激光照射；5-ALA-PDT組用10％的5-ALA的二甲基亞砜溶液(含60％DMSO)外敷腫瘤部位2h后進行激光照射；Ce6-PDT組按7.5mg/Kg體重，腹腔內給予Ce6的PBS溶液1h后進行激光照射；聯合治療組給予10％的5-ALA的二甲基亞砜溶液外敷腫瘤部位1h后，按7.5mg/Kg體重

5、，腹腔內給予Ce6的PBS溶液在經過1h后進行激光照射。均予波長652nm，光照劑量為100J/cm2的半導體激光照射。2周后處死裸鼠取腫瘤組織稱重，進行比較分析，觀察各器官系統的轉移情況，并把各裸鼠的瘤體、肝、脾、肺、腎送普通病理檢查。 結果：①在黑素瘤細胞株A-375中加入二氫卟吩e6并且在不受光照的條件下和濃度小于15μmol/L時各濃度組間細胞的存活率無明顯差異(p＞0.05)，在較高的濃度(大于15μmol/L)時Ce

6、6的細胞毒性對細胞的存活率影響較大(p＜0.01)；培養(yǎng)液中加入不同濃度的5-ALA對黑素瘤A-375細胞的存活率均沒有明顯影響(p＞0.05)；②5-ALA-PDT和Ce6-PDT均能有效地殺傷體外培養(yǎng)的人惡性黑素瘤細胞A-375，二者對黑素瘤A-375的殺傷作用與其濃度及光照劑量呈正相關(p＜0.01)。但是當光照劑量大于10J/cm2且5-ALA的濃度達到1.5mmol/L以上時其殺傷細胞的作用無顯著增加；③體內試驗當中PDT對腫

7、瘤的抑制程度，對照組與其他各組間均有明顯差別(p＜0.01)，Ce6-PDT組與5-ALA-PDT組有明顯差別而與聯合治療組無差別，5-ALA-PDT組與聯合治療組之間有明顯差別；④對照組和治療組均出現腫瘤的轉移，實驗過程中未發(fā)現荷瘤裸鼠的皮膚光毒性副反應。 結論：①二氫卟吩e6在低濃度(＜15μmol/L)時對細胞的毒性不大，但在高濃度時有一定的細胞毒性，5-ALA即使在較高濃度也不對細胞的存活產生明顯影響；②二氫卟吩e6與通