2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:PKR(double-stranded RNA-dependent protein kinase)是雙鏈RNA依賴性蛋白激酶,參與多種刺激因子介導的細胞周期阻滯和生長抑制。PKR的激活能通過抑制胰島β細胞增殖和阻滯細胞周期G1期參與2型糖尿病的發(fā)病過程。研究表明,細胞周期抑制蛋白P53的上調(diào)是PKR激活誘導胰島β細胞增殖抑制的重要信號分子,而其調(diào)控機制并不清楚。本研究旨在探討PKR通過SMUO化上調(diào)P53途徑誘導胰島β細胞周期阻滯

2、的調(diào)控機制。
  方法:采用轉(zhuǎn)染wt-PKR質(zhì)粒構(gòu)建PKR過表達的MIN-6(小鼠)胰島β細胞系。使用低濃度BEPP(1μM),糖脂毒性(16.7mM葡萄糖+0.1mM棕櫚酸)或前炎癥因子TNF-α(80nM)刺激MIN-6細胞,誘導PKR特異性激活。EdU熒光標記、Hoechst33258染色和流式細胞術(shù)分別評價胰島β細胞的增殖以及細胞周期進程的變化。免疫印跡檢測p-PKR和p-eIF-2α蛋白水平來分析PKR是否激活。免疫共沉

3、淀技術(shù)檢測PKR-Ubc9,P53-Ubc9及P53-SUMO-1蛋白結(jié)合水平繼而分析P53的SUMO化修飾,并采用免疫印跡檢測SUMO-1,Ubc9及P53蛋白表達,對P53進行蛋白半定量分析,且運用免疫熒光觀察PKR和Ubc9的細胞共定位。最后給予PKR抑制劑2-AP,神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑FUMO B1及SUMO化修飾抑制劑Spectomycin B1預處理MIN-6細胞,重復上述實驗,探討其相關(guān)分子機制。
  結(jié)果:在PKR

4、過表達的MIN-6細胞中,低濃度BEPP、糖脂毒性及前炎癥因子TNF-α均能特異性激活PKR,使PKR和eIF-2α發(fā)生磷酸化。PKR的激活能夠抑制胰島β細胞增殖,并使其細胞周期阻滯于G1期。其周期阻滯的主要機制是激活的PKR與Ubc9相互結(jié)合,激活的Ubc9能作為SUMO E2連接酶誘導P53發(fā)生SUMO化修飾。同時發(fā)現(xiàn)PKR和Ubc9主要共定位于胞漿。Spectomycin B1能抑制P53的SUMO化修飾和蛋白水平上調(diào)。同樣,給予

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