小麥抗葉銹近等基因系TcLr38的cDNA-AFLP分析.pdf

1、由小麥葉銹菌(Puccinia triticina)引起的小麥葉銹病是影響世界小麥穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)的重要病害之一，也是影響我國(guó)小麥生產(chǎn)的重要因素。持續(xù)篩選抗病基因和培育抗病品種是防治小麥葉銹病發(fā)生的主要手段。小麥抗葉銹基因Lr38發(fā)現(xiàn)位于中間偃麥草(Agropyron intermedium)第七組的一條染色體上，并被標(biāo)定在小麥的2AL染色體上。小麥抗葉銹基因Lr38是在苗期即開(kāi)始表達(dá)，具有很強(qiáng)的抗病性，國(guó)內(nèi)至今尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)Lr38表現(xiàn)高毒力的菌

2、株存在，是一個(gè)應(yīng)用潛力很大的由主效基因控制的抗病基因。 本研究應(yīng)用小麥葉銹菌菌株THTS為材料，該菌株對(duì)含有小麥抗葉銹基因Lr38的近等基因系材料TcLr38表現(xiàn)型為(0；)，而對(duì)感病對(duì)照Thatcher表現(xiàn)型為(4)。分別接菌于小麥抗葉銹近等基因系TcLr38和感病對(duì)照Thatcher，應(yīng)用cNA-AFLP技術(shù)從mRNA表達(dá)方面研究TcLr38與小麥葉銹菌互作時(shí)的基因表達(dá)的差異，結(jié)果如下： 1．共選用224對(duì)引物組合對(duì)

3、TcLr38差異表達(dá)的基因進(jìn)行了分析，共觀測(cè)到約4300條條帶，平均每一對(duì)選擇性引物可以獲得19條條帶。得到了68對(duì)能夠在小麥近等基因系TcLr38和感病對(duì)照Thatcher之間擴(kuò)增出差異條帶的多態(tài)性引物，多態(tài)性引物檢出率為30.3％。 2．得到了8種不同的差異表達(dá)的多態(tài)性條帶類型，其中2種為TcLr38與葉銹菌互作時(shí)的特異性表達(dá)的條帶類型。通過(guò)對(duì)68對(duì)多態(tài)性引物進(jìn)行篩選，一共得到8對(duì)引物能夠擴(kuò)增出特異性條帶。所得的8對(duì)AFLP

4、引物分別是P-CG/M-CTC、P-AC/M-CAC、P-CA/M-CGA、P-AA/M-CTG、P-GC/M-CAC、P-AG/M-CAA、P-AG/M-GGT。 3．得到了8條小麥抗葉銹近等基因系TcLr38的特異性表達(dá)片段，對(duì)其進(jìn)行序列測(cè)定與分析，經(jīng)Blastn比較，共有7個(gè)在數(shù)據(jù)庫(kù)中找到同源序列，且與一些植物中的EST序列具有較高的同源性，同源性為83％-100％；經(jīng)Blastx比較，6個(gè)序列所推導(dǎo)的蛋白質(zhì)序列在GenB

5、ank中找到其所對(duì)應(yīng)的同源序列，同源性為59％-92％，有5個(gè)序列為已知功能的基因，其中BRASSINOSTEROID INSENSITIVE1-associated receptor kinase 1 precursor、GTPase-activating protein、receptor-like kinase三個(gè)基因?qū)儆谛盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因，Receptor-like kinase可能與抗病或防御相關(guān)。而序列38-3在Blastn和B