完全脾切除對(duì)小鼠胰島功能的影響及其影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的：胰島β細(xì)胞的主要功能是產(chǎn)生和分泌胰島素，在調(diào)節(jié)機(jī)體糖代謝和維持正常血糖濃度過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，其正常的生理功能受體內(nèi)多種因素的調(diào)控，涉及神經(jīng)、激素及機(jī)體相關(guān)組織產(chǎn)生的活性因子作用?；谂R床資料和文獻(xiàn)報(bào)道，我們推測脾在生理?xiàng)l件下對(duì)于胰島β細(xì)胞的維持和調(diào)節(jié)具有十分重要的作用。為證明這一推測，搞清脾在調(diào)節(jié)和維持胰島功能中的作用，我們采用完全脾切除動(dòng)物模型，通過空腹血糖分析和糖耐量試驗(yàn)觀察小鼠胰島功能的改變。通過胰島的免疫組化染

2、色、細(xì)胞凋亡分析，觀察研究胰島功能的改變與胰島β細(xì)胞凋亡的關(guān)系，并對(duì)胰島β細(xì)胞凋亡與NO水平和NOS活性測定分析，進(jìn)一步探討脾臟切除對(duì)于胰島β細(xì)胞的影響作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.將完全脾切除小鼠分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組15只；另取正常小鼠及假手術(shù)小鼠作為正常組和假手術(shù)組，每組45只。
　　 2.采用葡萄糖氧化酶法測定小鼠空腹血糖，采用間接放射免疫法分析血清胰島素。
　　 3.采用腹腔糖耐量試驗(yàn)(In

3、traperitoneal glucose tolerance test，IPGTT)測定試驗(yàn)?zāi)┢诟鹘M小鼠糖負(fù)荷后不同時(shí)間點(diǎn)血糖和胰島素的水平。
　　 4.免疫組化染色觀察各組胰島β細(xì)胞形態(tài)。
　　 5.應(yīng)用ELISA試劑盒檢測胰島細(xì)胞凋亡。
　　 6.采用Dextran密度梯度離心法分離純化完全脾切除后不同時(shí)間小鼠胰島，分析其NO水平和NOS活性。
　　 7.免疫印跡分析完全脾切除后不同時(shí)間小鼠胰腺中的

4、iNOS表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.脾切除對(duì)各組小鼠空腹血糖的影響脾切除組在實(shí)驗(yàn)的3、5、7周血糖值（分別是4.89±1.24、5.88±1.32、6.12±0.24）與正常組（分別是4.94±0.68、5.67±0.985.83±0.49）相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；與假手術(shù)組（5.71±0.65、5.63±0.32、5.72±0.48）相比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 2.脾切除對(duì)

5、各組小鼠血清胰島素水平的影響脾切除組在實(shí)驗(yàn)的5、7周血清胰島素稍有減低（31.93±2.83、30.74±3.16），但與正常組（34.23±3.63、34.34±1.96）相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；與假手術(shù)組（32.23±3.47、33.24±1.72）相比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 3.脾切除對(duì)各組小鼠糖耐量的改變實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，腹腔糖耐量試驗(yàn)表明，葡萄糖注射后30min、120min各時(shí)間點(diǎn)脾切除組血糖

6、值（分別是14.09±2.06、9.55±2.13）均明顯高于正常組（10.47±2.18、6.35±2.09）和假手術(shù)組（10.79±2.86、6.06±2.61），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。葡萄糖曲線下面積脾切除組（39.38±4.2）與正常組（27.14±5.23）和假手術(shù)組（26.36±6.18）相比也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 在胰島素曲線中，胰島素水平在30min時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組（31.2±5.66）顯著低

7、于正常組和假手術(shù)組（分別為44.59±4.21;46.01±4.38），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；在120min時(shí)間點(diǎn)稍低于正常組和假手術(shù)組，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 4.脾切除對(duì)小鼠胰島組織形態(tài)的觀察免疫組化染色顯示正常組和假手術(shù)組胰島形態(tài)正常，胰島規(guī)則，邊界清晰，細(xì)胞密集，排列整齊；脾切除組在脾切除3周邊界不完整，細(xì)胞密度沒有顯著改變，在脾切除5周，外周部位細(xì)胞數(shù)量明顯減少，邊界模糊；在脾切除7周，沒有明

8、顯邊界，僅胰島中間部位有少量細(xì)胞染色明顯，細(xì)胞數(shù)量顯著減少。
　　 5.脾切除對(duì)小鼠胰島細(xì)胞凋亡的影響細(xì)胞凋亡的ELISA分析顯示：脾切除后3周，正常小鼠、假手術(shù)組和脾切除小鼠胰島細(xì)胞凋亡聚集值沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)；脾切除后5周，脾切除組胰島細(xì)胞凋亡聚集值顯著升高（1.40±0.26），與正常組、假手術(shù)組（分別為：0.89±0.17;0.95±0.18）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；脾切除后7周，脾切除組胰島細(xì)胞凋

9、亡聚集值顯著升高（1.71±0.27），與正常組、假手術(shù)組（分別是0.92±0.19、0.88±0.25）比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；但是與第5周脾切除組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 6.脾切除對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞NO的影響脾切除小鼠3、5、7周胰島組織NO水平隨時(shí)間逐漸增加。與正常組小鼠、假手術(shù)組小鼠相應(yīng)時(shí)間相比各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。血清NO水平變化規(guī)律相同。
　　 7.脾

10、切除對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞NOS活性及iNOS表達(dá)的影響脾切除小鼠5、7周胰島組織iNOS、TNOS水平與正常組小鼠、假手術(shù)組小鼠相應(yīng)數(shù)值相比均明顯升高，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。血清iNOS、TNOS水平變化規(guī)律相同。Western blotting法顯示脾切除的3、5、7周iNOS表達(dá)水平依次加強(qiáng)，而正常及假手術(shù)組iNOS表達(dá)水平低下?；叶确治霰砻髌⑶谐?、7周iNOS表達(dá)與正常組及假手術(shù)相比有顯著差異(P＜0.05)。