加味青蒿鱉甲湯對ANLL-CR患者BMNC來源DC誘導(dǎo)作用研究.pdf

1、目的: 急性白血病是嚴重威脅患者生命的惡性血液病，隨著現(xiàn)代化療方法的發(fā)展、新的化療藥物的開發(fā)以及造血干細胞移植的發(fā)展，其緩解率有了很大的提高，有的病例已治愈，但是許多患者仍不免復(fù)發(fā)而危及生命。白血病復(fù)發(fā)的根本原因是緩解后患者體內(nèi)仍存在微量白血病細胞，而機體不能對殘留白血病細胞進行免疫監(jiān)視而清除之。提高患者生存時間甚至治愈白血病，緩解期的治療顯得尤為重要，殘留白血病細胞的清除成為重點，這也是目前研究的重點和熱點之一。然而，目前尚缺乏緩解后

2、白血病即微小殘留白血病（Minimal Residu-al Disease in Leukemia,MRD-L）的有效治療方法，從中醫(yī)角度探討其治療方法無疑有著重要意義。 方法: 用加味青蒿鱉甲湯灌胃動物（大白兔）制備中藥含藥血清備用。將達到完全緩解標(biāo)準的急性白血病患者骨髓經(jīng)抗凝后，應(yīng)用綿羊紅細胞玫瑰花結(jié)程序從骨髓中分離出去T細胞的骨髓單個核細胞(TD-BMNC)，以加味青蒿鱉甲湯含藥血清與細胞因子聯(lián)合培養(yǎng)，觀察含藥血清對ANL

3、L-CR患者TD-BMNC來源的樹突狀細胞分化成熟情況的影響。用此法誘導(dǎo)分化的樹突狀細胞與純化的正常人或緩解期患者外周血T細胞共同培養(yǎng)，觀察對T細胞增殖能力的影響。用激發(fā)的T細胞與K562細胞共同培育，以MTT法測定該T細胞對K562細胞的殺傷活性。 結(jié)果: 1.DC的形態(tài) 倒置顯微鏡下:培養(yǎng)第4d可見細胞成簇生長,由圓形變?yōu)椴灰?guī)則形。培養(yǎng)第7d, 長出小刺狀結(jié)構(gòu),細胞質(zhì)變豐富,并長出樹突樣偽足，培養(yǎng)第9天樹突樣結(jié)構(gòu)更加明顯，細

4、胞質(zhì)更加豐富。 2.DC的抗原表達 實驗結(jié)果表明在這三種培養(yǎng)體系中，ANLL-CR患者去T細胞的骨髓MNC（TD-BMNC）均能分化為形態(tài)特征典型的DC，能表達成熟DC的特異性標(biāo)記（CD-86和CD-1a）,高表達HLA-DR。大、中、小劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組的CD-1a表達與細胞因子組比較有顯著差異；大劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組、大劑量加味青蒿鱉甲湯組的CD-86表達與細胞因子組比較有顯著差異；大劑量加味青蒿鱉甲

5、湯合細胞因子組的HLA-DR與大劑量加味青蒿鱉甲湯組、細胞因子組比較有顯著差異； 3.DC激活T細胞對K562細胞的殺傷率 效靶比10：1時，大劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）、大劑量加味青蒿鱉甲湯組（患者T細胞組）與細胞因子組（患者T細胞組）比較有顯著差異；大劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（正常人T細胞組）與大劑量加味青蒿鱉甲湯組（正常人T細胞組）、細胞因子組（正常人T細胞組）比較有顯著差異；效靶比20：1時，

6、大劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）、中劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）與細胞因子組（患者T細胞組）比較有顯著差異；中劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）與中劑量加味青蒿鱉甲湯組（患者T細胞組）比較有顯著差異；效靶比40：1時，中劑量加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）與細胞因子組（患者T細胞組）比較，有顯著差異。含藥血清組內(nèi)大中小劑量組之間比較無顯著差異。各效靶比時，加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組

7、（正常人T細胞組）與加味青蒿鱉甲湯合細胞因子組（患者T細胞組）比較無顯著差異，加味青蒿鱉甲湯組（正常人T細胞組）與加味青蒿鱉甲湯組（患者T細胞組）比較無顯著差異。同組不同效靶比之間無顯著差異。 結(jié)論: 在DC的誘導(dǎo)過程中，細胞體積逐漸增大、聚集成集落，顯示細胞的增殖，同時細胞胞體出現(xiàn)明顯的樹突狀突起，細胞形態(tài)不規(guī)則，胞質(zhì)豐富，并有成簇現(xiàn)象，顯示出DC的形態(tài)學(xué)特征。DC的免疫分子檢測顯示，在實驗的三種培養(yǎng)體系中， ANLL-CR

8、患者去T細胞的骨髓MNC（TD-BMNC）均能分化為形態(tài)特征典型的DC，能表達成熟DC的特異性標(biāo)記（CD-86和CD-1a），高表達HLA-DR。 加味青蒿鱉甲湯含藥血清有助于ANLL-CR患者TD-BMNC來源DC的誘導(dǎo)。加味青蒿鱉甲湯含藥血清聯(lián)合細胞因子、單純的加味青蒿鱉甲湯含藥血清、單純細胞因子誘導(dǎo)的DC激活的T細胞對K562細胞均有殺傷作用，以加味青蒿鱉甲湯含藥血清聯(lián)合細胞因子組為優(yōu)。其機理可能是含藥血清聯(lián)合細胞因子在誘