調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對(duì)克羅恩病小鼠模型的治療作用.pdf

1、IL-10基因缺陷小鼠是病理表現(xiàn)與人類克羅恩病相近的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，表現(xiàn)為小腸及大腸的慢性增生性炎癥反應(yīng)。克羅恩病的病因尚不明確，目前學(xué)界的基本觀點(diǎn)是免疫負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)制的減弱造成了腸粘膜下反應(yīng)性T細(xì)胞的過度活化和增殖，并分泌大量的炎性細(xì)胞因子造成了局部炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腸黏膜免疫和屏障功能障礙，引起各種臨床癥狀。 根據(jù)目前對(duì)克羅恩病的研究概況并結(jié)合目前免疫學(xué)在調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞研究領(lǐng)域的新進(jìn)展，我們以IL-10基因缺陷小鼠為克羅恩病動(dòng)物模

2、型，嘗試調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對(duì)克羅恩病的治療作用，為克羅恩病的治療提供新的思路。 本課題用新生小鼠脾臟組織培養(yǎng)的方法培養(yǎng)貼壁基質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)過3~4周的培養(yǎng)可以得到以成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞為主要成分的混合型基質(zhì)細(xì)胞。通過CD11b磁珠抗體的陰性選擇去除混合基質(zhì)中的巨噬細(xì)胞成分，再通過CD106抗體陽(yáng)性分選得到單一的內(nèi)皮型基質(zhì)細(xì)胞成分。該細(xì)胞在體外擴(kuò)增后用于調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)。將成年鼠全骨髓細(xì)胞通過CD117（stem cel

3、l factor SCF受體）磁珠分選可得到造血前體細(xì)胞。以體外生長(zhǎng)致60％融合度的內(nèi)皮基質(zhì)細(xì)胞作為誘導(dǎo)基質(zhì)與磁性純化的骨髓造血前體細(xì)胞共培養(yǎng)，經(jīng)過2周以上的誘導(dǎo)，獲得了高表達(dá)CD11b，B7-2，低表達(dá)Ia，CD11c的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞。以O(shè)VA(ovalbumin 卵白蛋白)TCR轉(zhuǎn)基因小鼠OT-2小鼠的CD4 T細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，以CD11C+Ia+成熟樹突狀細(xì)胞為刺激細(xì)胞，在400ng/ml OVA323-339多肽存在的條件下，

4、加入體外誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞檢測(cè)并確定其對(duì)CD4 T細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用。 以8周齡的IL-10基因缺陷鼠為早期克羅恩病模型，將體外誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞以每只小鼠2×106的數(shù)量腹腔注射作為治療，細(xì)胞移植后定期采集治療組與對(duì)照組小鼠眶靜脈血檢測(cè)血清中細(xì)胞因子TNFα及IL-6的含量的變化，8周后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物解剖并取結(jié)腸進(jìn)行病理檢測(cè)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞治療后的小鼠血清中炎性細(xì)胞因子TNFα及IL-6的水平?jīng)]有明顯