三七總皂苷對大鼠脊髓半橫斷損傷后神經(jīng)保護作用及cPLA2相關機制.pdf

1、目的：研究三七總皂苷對大鼠脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）模型的脊髓神經(jīng)功能的保護作用及對損傷段脊髓組織胞漿型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2，cPLA2)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein，GFAP)表達的影響。
　　 方法：SD成年大鼠55只（雌雄不計），隨機分成三組:(1)假手術(shù)組（Sham operation grou

2、p，n=5）;(2)脊髓損傷組(Control group，n=25);(3)PNS治療組（PNS experimental group，n=25）。脊髓損傷組和PNS治療組大鼠按術(shù)后存活時間再細分為五個亞組，即1天組，3天組，7天組，14天組和21天組，每時間點5只大鼠。采用脊髓半橫斷法制作脊髓損傷模型，假手術(shù)組只行椎板切除，不行脊髓半橫斷操作。PNS治療組大鼠在造模成功后15分鐘開始予三七總皂苷注射液經(jīng)腹腔內(nèi)注射20mg/kg，每天

3、給藥一次。脊髓損傷組大鼠則在造模成功后給予等量的生理鹽水經(jīng)腹腔內(nèi)注射，給藥次數(shù)和PNS治療組相同。所有大鼠在處死前于平坦處行BBB評分，評估脊髓損傷后大鼠脊髓運動神經(jīng)功能，統(tǒng)計學分析兩組間是否有差異。脊髓損傷組及PNS治療組大鼠在造模后的相應時間點分別處死行主動脈插管灌注固定并取脊髓組織標本，每只大鼠取以損傷段為中心的長約1cm的脊髓組織。在每個脊髓標本縱軸中心取橫行切片，每個檢測指標2張，分別作cPLA2和GFAP的免疫組化染色與尼氏

4、染色，觀察各自的表達情況并計數(shù)。SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件對比兩組動物的脊髓標本不同時間點cPLA2、GFAP的表達是否有統(tǒng)計學差異，并分析其相關性。
　　 結(jié)果：脊髓損傷后兩組大鼠其BBB評分值逐漸升高，PNS治療組均較脊髓損傷組評分值高，除術(shù)后第一天BBB評分與脊髓損傷組相比無明顯統(tǒng)計學意義，其余各時間點PNS治療組行為學評分均顯著高于脊髓損傷組，第三天、第七天比較其P值＜0.05，第十四天、第二十一天P值均小于0.01。

5、
　　 尼氏染色病理學檢測顯示假手術(shù)組大鼠脊髓組織神經(jīng)元形態(tài)完整，胞漿內(nèi)尼式小體清晰可見。脊髓損傷組光鏡下可見脊髓組織正常結(jié)構(gòu)喪失，灰質(zhì)形成較大空腔，少見完整的細胞結(jié)構(gòu)，胞漿混濁，尼氏體顯示不清。PNS治療組脊髓組織結(jié)構(gòu)比較清晰，損傷側(cè)的灰質(zhì)內(nèi)，偶見小空腔，有較多的正常神經(jīng)元，神經(jīng)元細胞核稍濃聚，核膜完整，胞漿內(nèi)尼氏體清晰可見，軸突清晰完整。
　　 cPLA2免疫組化結(jié)果示脊髓損傷后1d起cPLA2表達增加，免疫陽性細胞

6、數(shù)增多，神經(jīng)元腫脹，胞體增大，而PNS干預組cPLA2陽性細胞數(shù)較少，且cPLA2染色較淺，神經(jīng)元腫脹程度較輕，形態(tài)更為完整，周圍神經(jīng)組織破壞程度較輕。在7d，14d，21d損傷組cPLA2表達均顯著強于PNS干預組(P＜0.01)，且在各時間點內(nèi)PNS組cPLA2表達均弱于損傷組。GFAP免疫組化結(jié)果顯示，脊髓損傷后1d起GFAP表達增加，免疫陽性細胞數(shù)增多，神經(jīng)元腫脹，胞體增大，而PNS干預組GFAP陽性細胞數(shù)較少，且染色較淺，神經(jīng)

7、元腫脹程度較輕，形態(tài)更為完整，周圍神經(jīng)組織破壞程度較輕。在7d，14d，21d，SCI組GFAP表達均顯著強于PNS干預組(P＜0.05)，且在各時間點內(nèi)PNS組GFAP表達均弱于SCI組。對兩指標光密度值應用Pearson相關性分析，脊髓損傷后GFAP與cPLA2表達有顯著相關性(r=0.90，P=0.04)，說明在脊髓損傷過程中，星形膠質(zhì)細胞激活與cPLA2表達有一定聯(lián)系。
　　 結(jié)論：三七總皂苷對脊髓繼發(fā)性損傷有神經(jīng)保護作