荔枝核總皂苷對(duì)AD大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、 目的：研究荔枝核總皂苷對(duì)Aβ誘導(dǎo)阿爾茨海默病(AD)大鼠海馬神經(jīng)元損傷的抑制作用,并探討其機(jī)制。方法：Morris 水迷宮篩選學(xué)習(xí)、記憶正常的雄性SD大鼠90只,隨機(jī)分為假手術(shù)組和手術(shù)組,手術(shù)組側(cè)腦室注射10μg(2μg/1μl)聚集態(tài)Aβ25-35,假手術(shù)組注射雙蒸水,術(shù)后3周, Morris 水迷宮篩選模型成功大鼠,隨機(jī)分為模型組、0.42mg·kg-1多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1

2、、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組；治療組灌胃給藥,1次/日,連續(xù)4周。Morris水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力；4%多聚甲醛固定、石蠟包埋、連續(xù)冠狀切片,蘇木精伊紅(HE)染色法和免疫組織化學(xué)(SABC 法)染色,光鏡下觀察大鼠海馬神經(jīng)元損傷、Tau和iNOS的表達(dá), Image pro plus 6.0分析軟件計(jì)算Tau和iNOS表達(dá)的積光密度值(IOD)；Western-blotting檢測(cè)AKT、GSK-3β、NF

3、-κB、IKKβ蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：⑴大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力：與假手術(shù)組比較,AD模型組大鼠逃避潛伏期顯著增加(P<0.01),跨越平臺(tái)次數(shù)和平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯減少(P<0.01)；與 AD 模型組相比,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組均可縮短大鼠逃避潛伏期(P<0.05,P<0.01),且增加大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)(P<0.01)、延長(zhǎng)大鼠在平臺(tái)象限

4、停留的時(shí)間 (P<0.05)；各劑量荔枝核總皂苷間相互比較,于定位航行第四、五天,大鼠逃避潛伏期差異明顯(P<0.05),跨越平臺(tái)的次數(shù)在低劑量和高劑量組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑵HE染色結(jié)果：光鏡(×400)觀察：假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列緊密有序,胞核大而圓,著色淺,核仁清晰, AD 模型組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列疏松,胞漿濃縮、核固縮深染。多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·

5、d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組大鼠海馬神經(jīng)元變性受損現(xiàn)象明顯改善,且隨著劑量的增加,更為明顯。 (3) 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：①Tau表達(dá)：光鏡(×400)假手術(shù)組大鼠海馬組織CA1區(qū)少見(jiàn)細(xì)胞胞漿中沉積棕黃色顆粒,AD模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)胞漿中沉積棕黃色顆粒的細(xì)胞明顯增加。多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組大鼠海馬組織

6、CA1區(qū)胞漿有棕黃色顆粒沉積的細(xì)胞明顯減少,且隨著劑量的增加,更為明顯。Tau 表達(dá)陽(yáng)性染色的積光密度值,與假手術(shù)照組比較,AD模型組明顯升高(P<0.01)；與AD模型組比較,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的積光密度均降低(P<0.05)；荔枝核總皂苷三劑量治療組間相互比較, 0.125g·kg-1·d-1和0.51g·kg-1·d-1治療組

7、間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②Nios表達(dá)：光鏡(×400)假手術(shù)組大鼠海馬組織CA1區(qū)少見(jiàn)細(xì)胞胞漿中沉積棕黃色顆粒,AD模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)胞漿中沉積棕黃色顆粒的細(xì)胞明顯增加。多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組大鼠海馬組織CA1區(qū)胞漿有棕黃色顆粒沉積的細(xì)胞明顯減少,且隨著劑量的增加,更為明顯。Nios表達(dá)陽(yáng)性染色的積光密度值,與假

8、手術(shù)組比較,模型組明顯升高(P<0.01)；與AD 模型組比較,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0. 51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的積光密度均降低(P<0.01)；荔枝核總皂苷三劑量組間相互比較,0.125g·kg-1·d-1和0.51g·kg-1·d-1治療組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(4) Western-blotting 檢測(cè)蛋白的表達(dá)：①AKT蛋白的表達(dá)：與假

9、手術(shù)組比較,AD模型組表達(dá)最低(P<0.01)；與AD 模型組比較,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的蛋白表達(dá)均高(P<0.05)；荔枝核總皂苷三劑量治療組間相互比較,0.125g·kg-1·d-1和0. 51g·kg-1·d-1治療組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②GSK-3β蛋白的表達(dá)：與假手術(shù)組比較,AD模型組表達(dá)最高(P<0.05

10、)；與AD模型組比較,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的蛋白表達(dá)均低(P<0.05)；荔枝核總皂苷三劑量治療組間相互比較, 0.125g·kg-1·d-1和0.51g·kg-1·d-1治療組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③NF-κB蛋白的表達(dá)：與假手術(shù)組比較,AD模型組表達(dá)最高(P<0.01)；與 AD 模型組比較,多奈哌齊治療組、0.1

11、25g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的蛋白表達(dá)均低(P<0.05)；荔枝核總皂苷三劑量治療組間相互比較,0.125g·kg-1·d-1和0.51g·kg-1·d-1治療組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。④IKKβ蛋白的表達(dá)：與假手術(shù)組比較,AD模型組表達(dá)最高(P<0.05)；與AD模型組比較,多奈哌齊治療組、0.125g·kg-1·d-1、0.25g·kg-1·d-

12、1、0.51g·kg-1·d-1荔枝核總皂苷治療組的蛋白表達(dá)均低( P<0.05 )；荔枝核總皂苷三劑量治療組間相互比較, 0.125g·kg-1·d-1和0.51g·kg-1·d-1治療組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：1. 荔枝核總皂苷可抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷,且具有一定劑量依賴性。2. 荔枝核總皂苷抑制AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷可能途徑是荔枝核總皂苷通過(guò)改善胰島素信號(hào)通路障礙、抗氧化及抗炎作用。(1

13、)荔枝核總皂苷抑制AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷的可能途徑是激活PI3K/Akt胰島素信號(hào)通路的Akt從而降低GSK-3β活性,減少tau 異常磷酸化,抑制神經(jīng)元纖維纏結(jié)的形成,減輕神經(jīng)元的損傷。 (2)荔枝核總皂苷抑制AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷的可能途徑是激活PI3K/Akt胰島素信號(hào)通路的Akt進(jìn)而磷酸化IKK,降低IKKβ/NF-κB通路活性,減少 iONS 的表達(dá)和 NO 的生成,從而減輕神經(jīng)元內(nèi)炎癥反應(yīng),漸少Aβ的沉積從而減輕神經(jīng)元的損傷