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文檔簡介
1、目的:
耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是一種具有多重耐藥性的致病菌,普遍流行于世界各地,其感染的高發(fā)病率和致死率,已成為醫(yī)學(xué)界的一個普遍難題。燒燙傷患者的機(jī)體免疫力低下,極易繼發(fā)感染MRSA,常可增加臨床治療的難度,導(dǎo)致較高的死亡率。因此,本實驗采用不同的感染方法,分別探討了建立燙傷后合并MRSA感染模型的實驗條件,在國內(nèi)首次采用SK
2、H-1無毛小鼠建立了較為符合臨床感染實際的燙傷后合并MRSA感染模型。所建立的感染模型對進(jìn)一步開展?fàn)C傷后合并MRSA感染的臨床研究及拓展SKH-1無毛小鼠的研究應(yīng)用范圍具有重要意義。
方法:
第一部分:模型一:15只SPF級SKH-1無毛小鼠隨機(jī)分為對照組、A組、a組、B組、b組。A組、a組、B組、b組小鼠采用預(yù)加熱(100℃)的銅塊燙傷,其中A組和a組燙傷40s,B組和b組燙傷60s,再分別給A組和B組小鼠表面接種
3、109CFU/只(MRSA-ST239),a組和b組小鼠接種108CFU/只(MRSA-ST239)。模型二:48只SPF級SKH-1無毛小鼠隨機(jī)分為PBS對照組、模型組和治療組,模型組和治療組小鼠采用預(yù)加熱(100℃)的銅塊燙傷40s,切痂后接種108CFU/只MRSA,并對治療組小鼠尾靜脈注射替考拉寧。模型三:48只SPF級SKH-1無毛小鼠隨機(jī)分為對照組、燙傷合并感染組(D組)、單純感染組(E組)和單純燙傷組(F組),D組小鼠采用
4、預(yù)加熱(100℃)的紗布(3×5cm)燙傷30s后予以MRSA氣溶膠攻擊的方式建立模型。以上3種模型,分別采用體重、菌血癥率、血常規(guī)、皮膚及臟器荷菌量和病理組織學(xué)變化等指標(biāo),對模型進(jìn)行綜合評價。
第二部分:48只SKH-1無毛小鼠,隨機(jī)分成PBS對照組,單純感染組和燙傷合并感染組。合并感染組小鼠采用預(yù)加熱(100℃)的紗布(3×4cm)燙傷30s后,再予以MRSA氣溶膠攻擊。采用體重、血常規(guī)、菌血癥率、皮膚和臟器荷菌量、病理組
5、織學(xué)變化和分子生物學(xué)等指標(biāo)對模型進(jìn)行綜合評價。
結(jié)果:
第一部分:模型一:與對照組相比,A組、a組、B組、b組小鼠體重顯著下降;A組、a組、B組、b組小鼠感染后2d,菌血癥發(fā)生率均為100%;感染后10d,各組小鼠皮膚荷菌量均>108 CFU/mL;組織病理學(xué)觀察, A組、a組、B組、b組小鼠皮膚出現(xiàn)明顯炎癥病變。模型二:與對照組相比,模型組和治療組小鼠體重均下降極顯著(p<0.01);模型組小鼠生存率為50%,治療
6、組小鼠生存率為60%;模型組和治療組小鼠菌血癥發(fā)生率均較高(100%); MRSA在模型組和治療組小鼠各臟器均有不同程度的播散;模型組小鼠皮膚可見多發(fā)性潰瘍及膿腫,鏡下觀察炎癥細(xì)胞浸潤及膿腫灶明顯。模型三:與對照組相比,D組小鼠體重下降極顯著(p<0.01);感染后2d,D組菌血癥率為100%;D組白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)極顯著增多(p<0.01);皮膚荷菌量達(dá)108CFU/g,肺荷菌量達(dá)107~106CFU/organ;組織病理學(xué)觀察,
7、皮膚為深Ⅱ度燙傷,大量炎癥細(xì)胞浸潤,肺部出現(xiàn)支氣管肺炎病變。
第二部分:與其他兩組相比,合并感染組小鼠第3天體重下降明顯(p<0.05);白細(xì)胞數(shù)顯著增多(p<0.01);菌血癥率達(dá)100%;皮膚和肺荷菌量較高,分別達(dá)108CFU/g和106CFU/g;鏡下觀察皮膚表皮層脫落,真皮層凝固性壞死,且大量炎癥細(xì)胞浸潤,感染后期可見結(jié)締組織增生,肺部為典型的支氣管肺炎病變,脾臟呈敗血脾改變;免疫組化結(jié)果顯示皮膚組織內(nèi)CD138呈陽性
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