IFN-DC分化相關信號通路初探.pdf

1、目的:研究JAK-STAT信號轉導通路在IFN-α促進及加速單核細胞分化產生高度活化的、部分成熟的DC(IFN-DC)發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用。
　　方法:采集正常供體動員的外周造血干細胞(G-PBSC),Ficoll法分離獲得單個核細胞,采用磁珠分離獲得CD14+單核細胞,根據(jù)培養(yǎng)條件的不同分為三組,分別為CD14+單核細胞(對照組), CD14+單核細胞+800U/ml GM-CSF(GM-CSF組)和CD14+單核細胞+10

2、00 U/ml IFN-α2b+800U/ml GM-CSF(IFN-α2b+GM-CSF組)。進行如下實驗:1. IFN-α2b+GM-CSF組和GM-CSF組分別于加入細胞因子0min、10min、30min、1h、2h、4h提取總蛋白,通過Western blot實驗,觀察兩組在不同時間點下相關信號蛋白(JAK1, p-JAK1, STAT1及p-STAT1)的表達情況;并檢測IFN-α2b+GM-CSF組和GM-CSF組分別加入

3、JAK-STAT信號通路阻斷劑(AG490)后相關信號蛋白的表達高峰是否減弱;2.以CD14+單核細胞CD80、CD86及CD83的表達水平作為基線水平,分別檢測IFN-α2b+GM-CSF組和GM-CSF組各培養(yǎng)三天后上述CD分子的表達水平,并檢測在以上兩組分別加入AG490各培養(yǎng)三天后上述CD分子的表達水平。
　　結果:1. IFN-α2b+GM-CSF組培養(yǎng)三天后的IFN-DC表達DC較為特征性標志,包括CD11c、CD86

4、、CD80、HLA-DR及CD209;CD83為DC的成熟標志之一,在IFN-DC上部分表達;同時在漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)高表達的CD123,在IFN-DC亦高表達;培養(yǎng)三天后的細胞形態(tài)上可見突起。2.Western blot檢測IFN-α2b+GM-CSF組在不同時間點相關蛋白表達顯示:JAK1和STAT1磷酸化水平在30min表達達到高峰,后逐漸減弱。予AG490干預后,JAK1和STAT1磷酸化水平在30min表達減弱。同時