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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
為進(jìn)一步研究Robo信號(hào)蛋白在膀胱癌病理發(fā)生中的作用并探討治療的方法。擬在體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞,并檢測(cè)Robo蛋白在人膀胱癌移行上皮細(xì)胞T24中的表達(dá)。若該蛋白在T24細(xì)胞中表達(dá),擬用RNA干擾技術(shù)沉默該基因并觀察腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。嘗試探索膀胱癌的病理機(jī)制及實(shí)驗(yàn)性的治療方法。
方法:
1、體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞,并用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)是否有Robo蛋白的表達(dá)。如果有表
2、達(dá),表達(dá)何種亞型?
2、用免疫熒光和蛋白質(zhì)印跡法進(jìn)一步證實(shí)免疫組織化學(xué)的結(jié)果
3、利用RNA干擾技術(shù),尋找表達(dá)基因的沉默位點(diǎn),構(gòu)建合理的表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞,免疫熒光化學(xué)觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果,western blot來(lái)檢測(cè)該表達(dá)基因沉默后蛋白表達(dá)的變化。
4、MTT法檢測(cè)該表達(dá)基因沉默后細(xì)胞的存活率的變化。
結(jié)果:
1、免疫組化和免疫熒光檢測(cè)顯示在體外培養(yǎng)的人膀胱移行上皮癌
3、細(xì)胞T24中有Robo陽(yáng)性細(xì)胞檢出。分類抗體染色顯示表達(dá)亞型為Robo1和Robo4,而正常膀胱移行上皮細(xì)胞中無(wú)表達(dá)。
2、Western blot檢測(cè)顯示在人膀胱移行上皮癌細(xì)胞T24中有Robo1和Robo4蛋白表達(dá)。
3、采用RNA干擾技術(shù)能有效沉默T24中Robo1和Robo4的表達(dá),尤其是Robo1的表達(dá)幾乎受到全部抑制(P<0.01)。
4、MTT法檢測(cè)顯示Robo1干擾組細(xì)胞的存活率明顯下降,與
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