基于整合子—基因盒系統(tǒng)的胃腸道革蘭陰性細(xì)菌耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的：了解H.pylori對(duì)呋喃唑酮的耐藥率，探討其耐藥機(jī)制；考察消化系統(tǒng)分離的臨床常見(jiàn)革蘭陰性細(xì)菌整合酶的流行狀況；分析整合子的種類(lèi)、結(jié)構(gòu)特征和分布，探討其在宿主菌抗生素耐藥及多重耐藥中的作用；通過(guò)E.coli整合子的檢測(cè)和染色體DNA的脈沖場(chǎng)電泳分析等，尋找消化系統(tǒng)常見(jiàn)細(xì)菌耐藥性傳播的途徑與可能機(jī)制，增強(qiáng)臨床醫(yī)生抗生素正確、合理的使用意識(shí)。 結(jié)果:1.46株H.pylori臨床分離菌中有4株對(duì)呋喃唑酮耐藥，耐藥率為8.7％，

2、以低水平耐藥為主，未見(jiàn)有高水平耐藥。PCR擴(kuò)增porD和oorD基因，產(chǎn)物大小為592bp和458bp?；驕y(cè)序后發(fā)現(xiàn)，呋喃唑酮耐藥H.pylori臨床分離株中，porD基因有三個(gè)位點(diǎn)的突變，分別是C357T、A356G、G353A，但以C357T最為常見(jiàn)，而中度敏感的菌株中也發(fā)現(xiàn)了基因的突變C357G；oorD基因也有三個(gè)位點(diǎn)的突變，分別是A041G、A122G、C349A(G)，在349位既有C→A又有C→G突變，但是都導(dǎo)致了天冬酰

3、胺被賴(lài)氨酸代替。H.pylori對(duì)呋喃唑酮耐藥性的誘導(dǎo)未獲成功。 2.臨床分離的胃腸道革蘭陰性細(xì)菌三類(lèi)整合酶的陽(yáng)性率差異較大，Ⅰ類(lèi)整合酶的陽(yáng)性率為43.2％、Ⅱ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)整合酶的陽(yáng)性率分別為49％和2％，以E.coli Ⅰ類(lèi)整合酶的陽(yáng)性率為最高，達(dá)61％。3.PCR擴(kuò)增整合酶陽(yáng)性的臨床分離株Ⅰ類(lèi)整合子，測(cè)序后發(fā)現(xiàn)共有5種不同基因盒，分別為：dfrA17、aadA5、aad4Al、aadA2、dhrfXI。有4種不同的整合子基因

4、盒排列方式大小在1500～2000bp左右，E.coli中共檢測(cè)到89株細(xì)菌含有Ⅰ類(lèi)整合子，絕大多數(shù)整合子的排列方式為：dfrA17-aadAS,僅有一株細(xì)菌排列方式為aadAl；而肺炎克雷伯菌中僅有1株含有基因盒，其排列方式為aadA，鮑曼不動(dòng)桿菌共檢測(cè)到4株含有整合子，其基因盒排列方式為：dhrfXI-aadA2；陰溝腸桿菌中檢測(cè)到一株含有整合子，其基因盒排列方式與E.coli基因盒的排列方式相同。 4.89株整合子陽(yáng)性的E.col

5、i中21株產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶。 5.在整合子陽(yáng)性的E.coli中，有10株在Ⅰ類(lèi)整合子第一個(gè)3’保守區(qū)域后檢測(cè)到orf513、orf 3-like、 IS3000和orf5基因，但在這10株中，僅有5株在orf513基因的下游檢測(cè)到blaCTX-M-1基因，首次報(bào)道了分離于人E.coli菌株中檢測(cè)到ISCR1相關(guān)的含有blaCTX-M-1基因復(fù)雜Ⅰ類(lèi)整合子。PFGE分析blaCTX-M-1基因相關(guān)的含有復(fù)雜Ⅰ類(lèi)整合子的E.col

6、i發(fā)現(xiàn)，zj102和zj562兩株源于同一克隆。 結(jié)論: 1.鎮(zhèn)江地區(qū)H Pylori臨床分離株對(duì)呋喃唑酮的耐藥率較低，而且以低水平的耐藥為主，H Pylori菌對(duì)呋喃唑酮的耐藥可能與porD和oorD基因的突變有關(guān)。 2.鎮(zhèn)江地區(qū)流行的整合子以Ⅰ類(lèi)整合子為主，其中E.coli整合子檢出率為高。分析其可變區(qū)基因盒結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，這些耐藥基因盒主要編碼甲氧芐啶耐藥和鏈霉素、壯觀(guān)霉素耐藥的兩大基因家族。 3.鎮(zhèn)江地