人星形細胞瘤中VMP1表達及其與腫瘤生物活性的關系.pdf

1、研究背景:
　　 膠質瘤是最常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，其中約21.2％～51.6％是星形細胞腫瘤。星形細胞瘤最重要的特征是腫瘤細胞無限增殖，呈彌漫性、侵潤性生長，即使現(xiàn)代顯微神經(jīng)外科技術也難以做到病理學上的完全切除，同時大多數(shù)星形細胞瘤對放療、化療不敏感，因而治療后易復發(fā)，且隨著手術和復發(fā)次數(shù)的增加，其惡性程度有上升趨勢，因此星形細胞瘤總體預后不佳。目前已證實腫瘤細胞凋亡機制受遏、細胞異常增殖、細胞周期調控紊亂等調節(jié)機制失衡均是星形

2、細胞腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因，因此細胞凋亡、侵襲轉移和細胞周期調控的分子機制及尋找相關的關鍵靶點成為星形細胞瘤的研究熱點。
　　 泡膜蛋白-1(Vacuole Membrane Protein-1，VMP1)又稱跨膜蛋白49(Transmembrane Protein 49，TMEM49)為2002年DusettiNJ等在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種與急性胰腺炎有關的蛋白質，在胰腺細胞內(nèi)過表達促進細胞內(nèi)空泡的形成，并且融合到這些空泡的細胞膜上

3、，因此而得名。研究表明VMP1有多種生物學功能：在急性胰腺炎中VMP1過表達可誘導細胞凋亡產(chǎn)生；VMP1參與細胞周期調節(jié)，作用于S期，對細胞增殖起抑制作用；VMP1能在細胞表面形成特定“接觸點”，通過與細胞間緊密連接標記蛋白閉鎖小帶-1(Zonula Occludens，ZO-1)相互作用，在細胞間建立緊密連接，干擾VMP1表達后導致細胞間連接無法建立；VMP1可通過Atg域與哺乳動物自噬起始因子Beclin-1相互作用，這是形成自噬吞

4、噬體的關鍵所在，VMP1表達下降后可抑制細胞內(nèi)自噬。來自動物和人類腫瘤的研究均顯示VMP1不僅對細胞凋亡進行調節(jié)，而且在多種腫瘤細胞發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉移過程中起重要作用，證實VMP1基因是一種新的抑癌基因。目前VMP1在星形細胞瘤方面的研究報道尚少，本課題旨在初步闡明VMP1在人星形細胞瘤中的表達規(guī)律，進而探討其表達與腫瘤生物活性的關系。
　　 研究目的:
　　 1.初步探討正常星形細胞系和星形細胞瘤細胞系中VMP1 m

5、RNA及蛋白的表達。
　　 2.初步闡明人腦星形細胞瘤中VMP1的表達規(guī)律。
　　 3.探討星形細胞瘤中VMP1表達與腫瘤生物活性的關系。
　　 材料和方法:
　　 1.培育正常星形細胞系(NHA)和星形細胞瘤細胞系(LN18、A172、SNB19、LN444、LN464)，六種細胞系均由中山大學中山醫(yī)學院黎孟楓教授惠贈。收集6例正常腦組織標本和87例星形細胞瘤患者手術切除新鮮標本。星形細胞瘤患者均有完整

6、臨床資料包括性別、年齡、病理分級、波形蛋白(Vimentin)、Ki-67增殖指數(shù)(Ki-67Labbing index，Ki-67LI)等。
　　 2.免疫組織化學、半定量RT-PCR檢測上述細胞系VMP1蛋白及mRNA的表達。免疫組織化學法檢測93例標本中VMP1的表達規(guī)律。
　　 3.使用染色系數(shù)(SI)半定量評價VMP1染色情況，根據(jù)積分光密度值比值評估m(xù)RNA表達差異。
　　 4.結合臨床資料分析VMP

7、1表達與星形細胞瘤病理級別、Vimentin、Ki-67LI、可能存在的關系。
　　 5.全部數(shù)據(jù)由SPSS16.0統(tǒng)計軟件完成統(tǒng)計學分析，t檢驗用于定量資料間的比較，x2檢驗用于定性資料間的比較，Spearman's相關性檢驗用于變量間的相關性分析。檢驗過程均以p值小于0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1.人正常星形細胞系和星形細胞瘤細胞系中均可見VMP1蛋白表達，呈胞漿型，星形細胞瘤細胞系中VM

8、P1染色指數(shù)較正常星形細胞系低。
　　 2.根據(jù)相對積分密度值比值顯示人正常星形細胞系(NHA)中VMP1 mRNA表達分別是惡性星形細胞瘤細胞系(LN18、A172、SNB19、LN444、LN464)表達量的4.4、3.1、1.5、1.6、1.3倍。
　　 3.VMP1蛋白在人正常腦組織和星形細胞瘤標本中有表達，分布于細胞漿，在各級星形細胞瘤中VMP1蛋白陽性率為：Ⅰ級100％(17/17)，Ⅱ級92％(23/25)

9、，Ⅲ級21.4％(6/28)，Ⅳ級11.7％(2/17)。Spearman's相關分析顯示，VMP1表達與星形細胞瘤病理級別呈負相關(r=-0.907，P=0.034)。
　　 4.在高級別星形細胞瘤患者中VMP1高表達比例為2.27％，而在低級別患者中則為92.85％(x2=71.848，P＜0.001)；Vimentin陽性患者中VMP1高表達比例為27.27％,在陰性患者中比例為78.12％(x2=5.553，P=0.01

10、8)；Ki-67LI大于8％患者中VMP1高表達比例為19.60％，在小于等于8％患者中比例為83.33％(x2=34.503，P＜0.001)。Spearman's相關分析顯示，VMP1表達與星形細胞瘤病理級別(r=-0.909，P＜0.001)、Vimentin(r=-0.253，P=0.018)、Ki-67LI(r=-0.630，P＜0.001)均呈負相關。
　　 結論:
　　 1.人正常星形細胞系和星形細胞瘤細胞