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文檔簡介
1、目的:
類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關節(jié)組織慢性炎癥、骨及軟骨破壞為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn)miRNAs(microRNAs)與RA的發(fā)生發(fā)展密切相關,循環(huán)miRNAs(circulating miRNAs)作為RA診斷標記物具有重要的潛在價值。本課題組前期在RA患者血漿中篩選得到9種差異性表達的miRNAs,本文進一步檢測這些差異性表達的miRNAs在膠原誘導的
2、關節(jié)炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠血漿中變化并探討血漿miRNAs的可能來源,從而為研究循環(huán)miRNAs在RA發(fā)病過程中的作用提供理論依據(jù)。
方法:
(1)使用牛Ⅱ型膠原和佐劑免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用實時熒光定量PCR(quantitative Real-time fluorescent PCR,qRT-PCR)檢測CIA小鼠及正常對照小鼠血漿和外周血單個核細胞
3、(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平。
(2)分離CIA及正常小鼠PBMC,分別采用100 ng/ml LPS及2.5μg/ml PHA體外刺激培養(yǎng)1h和2h。應用qRT-PCR檢測培養(yǎng)細胞和上清中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平。
(3)采
4、用流式細胞術(flow cytometry,F(xiàn)CM)分選CIA及正常對照小鼠外周血、脾臟、淋巴結(jié)CD4+T、CD8+T細胞,采用實時熒光定量PCR檢測CD4+T、CD8+T細胞中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平。
結(jié)果:
(1)與正常DBA/1J小鼠相比,CIA小鼠血漿miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平均顯著增高(P均<
5、0.05)。
(2)CIA小鼠PBMC中miR-181d表達水平高于正常對照小鼠(P<0.05),但miR-9、miR-122-3p及miR-342-3p的表達水平二者無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。
(3)與相應空白對照組相比,LPS刺激后的小鼠PBMC及培養(yǎng)上清中miR-9、 miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平未見明顯改變(P均>0.05)。PHA刺激雖未改變小鼠PBMC和培養(yǎng)
6、上清中miR-9、miR-122-3p及miR-342-3p的表達水平(P均>0.05),但能顯著上調(diào)培養(yǎng)細胞和上清中miR-181d表達水平,且PHA刺激的CIA小鼠PBMC和培養(yǎng)上清中miR-181d的表達水平明顯高于相應刺激的正常對照小鼠(P<0.05)。
(4)與正常對照相比,CIA小鼠外周血CD4+T細胞中miR-181d的表達水平無明顯差異(P>0.05),外周血CD8+T細胞中miR-181d的表達水平雖有升高趨
7、勢,但無統(tǒng)計學差異(P=0.07);CIA外周血CD4+T、CD8+T細胞中miR-9、miR-122-3p、及miR-342-3p的表達水平均無明顯差異(P>0.05)。
(5)CIA淋巴結(jié)CD4+T、CD8+T細胞中miR-181d的表達水平與正常相比無明顯差異(P>0.05),但CD4+T細胞中miR-342-3p的表達升高,而miR-9及miR-122-3p的表達水平降低(P均<0.05);CD8+T細胞中miR-12
8、2-3p的表達水平也降低(P<0.05)。
(6)與正常對照相比,CIA小鼠脾臟CD4+T、CD8+T細胞中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表達水平均無明顯差異(P均>0.05)。
結(jié)論:
1、從RA患者外周血中篩選得到的四種差異性表達的miRNAs在關節(jié)炎小鼠模型中也發(fā)生特征性改變,但二者結(jié)果不完全一致。
2、miR-181d在CIA小鼠血漿、PBMC以
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