UDCA、SAMe對(duì)人類滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1B3表達(dá)的影響.pdf

1、背景:妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)是妊娠期特有的并發(fā)癥，至今仍缺少有效的防治措施。ICP最顯著的特點(diǎn)就是孕母血膽汁酸水平增高，研究證明高水平的膽汁酸是增加胎兒風(fēng)險(xiǎn)的重要因素。高膽汁酸不僅見于母血，其胎兒臍血、羊水胎糞的膽汁酸水平相比正常孕婦也顯著增高，提示胎盤膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)異常是ICP危害胎兒的重要機(jī)制。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B3存在于胎盤組織并具有膽汁酸和膽紅素轉(zhuǎn)運(yùn)功能，本課題組前期研究表明ICP孕婦胎盤組織中OATP1B3表達(dá)下調(diào)

2、，首次利用體外滋養(yǎng)細(xì)胞模型研究發(fā)現(xiàn)OATP1B3能特異性的轉(zhuǎn)運(yùn)GCA、GCDCA兩種膽汁酸。多項(xiàng)研究表明胎盤中OATP1B3參與了母胎間膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1B3的表達(dá)的影響具有重要的臨床意義，這將為人類胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)特征及胎兒風(fēng)險(xiǎn)防范提供理論依據(jù)。
　　目的:研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對(duì)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1B3表達(dá)的影響，為人

3、類胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)特征及胎兒風(fēng)險(xiǎn)防范提供理論依據(jù)。
　　方法:應(yīng)用MTT法檢測s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對(duì)SWAN細(xì)胞的增殖作用，以不同的藥物濃度作用于SWAN細(xì)胞不同的時(shí)間，用RT Real-time PCR和Western blot檢測藥物對(duì)OATP1B3的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：(1) MTT法:UDCA以20μM、50μM濃度作用24h、48h、72h對(duì)細(xì)胞無明顯毒性作用(

4、P＞0.05);SAMe以5μM、10μM、15μM、20μM、35μM濃度作用24h、48h、72h對(duì)細(xì)胞無明顯毒性作用(P＞0.05);(2)UDCA、SAMe對(duì)OATP1B3表達(dá)的影響:a.Real-time PCR檢測20μM、50μMUDCA作用于swan細(xì)胞24h后OATP1B3mRNA表達(dá)分別上調(diào)了14％、20％，48h后分別上調(diào)了43％、66％，其中50μMUDCA處理組和對(duì)照組差異有明顯的意義(P＜0.05);15μM

5、、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞24h后mRNA分別上調(diào)了83％、320％(P＜0.05)。15μM、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞48h后分別上調(diào)了48％、191％(P＜0.05)。15μMSAMe24h、48h組和35μMSAMe24h、48h組分別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。b.Western blot檢測20μM、50μMUDCA作用于swan細(xì)胞48h后OATP1B3蛋白表達(dá)分別上調(diào)了1％、146％，其中

6、50μMUDCA組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Western blot檢測15μM、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞48h后OATP1B3蛋白表達(dá)分別上調(diào)了31％、28％(P＜0.05);
　　結(jié)論:(1)UDCA在50μM以下濃度72h內(nèi)對(duì)Swan細(xì)胞沒有明顯的毒性作用;SAMe在35μM以下濃度72h內(nèi)對(duì)Swan細(xì)胞沒有明顯的毒性作用。(2)熊去氧膽酸(UDCA)和腺苷蛋氨酸(SAMe)可以上調(diào)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1