健康人腸道益生菌的分離、篩選、功能特性及應(yīng)用研究.pdf

1、本研究以分離來源于中國健康人群腸道的益生菌為目的，以期獲得更適合中國人腸道特點(diǎn)，擁有自主知識產(chǎn)權(quán)、具有獨(dú)特的功能特性，安全性和生產(chǎn)性能達(dá)到應(yīng)用水平的的菌株。 首先，從20份健康成人和10份一月齡嬰兒的糞便中分離、純化乳酸菌和雙歧桿菌，通過細(xì)菌形態(tài)學(xué)技術(shù)和API鑒定技術(shù)對分純菌株進(jìn)行鑒定，共得到分屬于7個種的19個純化的潛在益生菌菌株。 純化菌株分別在ptt2.O和膽汁鹽濃度0.3％、pH3.O的條件下，進(jìn)行耐酸和耐膽汁液

2、的體外篩選，獲得存活率大于1％的菌株15個。繼而以腸癌細(xì)胞系HT-29為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，以?5個菌株進(jìn)行腸道吸附能力的體外篩選實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，有7個菌株腸道吸附能力較好，其中嗜酸乳桿菌LA-SYO2、類干酪乳桿菌類干酪亞種LPP-SY33和長雙歧桿菌．BL-SY3l對腸癌細(xì)胞HT-29的吸附能力較強(qiáng)。對此7個菌株進(jìn)行降低膽固醇、抑制致病菌和幽門螺桿菌特性的體外研究表明，7個菌株普遍具有較強(qiáng)的同化膽固醇能力，其中4個菌株可脫除乳脂肪中50％以

3、上膽固醇，可作為生產(chǎn)低膽固醇發(fā)酵乳制品的備選菌株。7個菌株對腸道致病菌抑制作用研究表明，各菌株耗盡上清液對志賀氏茵的抑制作用最明顯，其次為沙門氏菌，而對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑制作用相對較弱。7個菌株的耗盡上清液對幽門螺桿菌的抑制明顯高于對腸道致病菌的抑制效果，且抑制能力不存在乳酸依賴性，但具有濃度效應(yīng)。 對7個入選菌株進(jìn)行工藝篩選，包括抗凍干能力、與傳統(tǒng)發(fā)酵劑菌株的配伍能力、貯存穩(wěn)定性以及發(fā)酵產(chǎn)品的風(fēng)味評價。結(jié)果表明，嗜酸乳

4、桿菌LA-SY02，LA-SY26和長雙歧桿菌BL-SY31具有較強(qiáng)的抗冷凍干燥的能力。嗜酸乳桿菌的3個菌株(LA-SY02，LA-SY26，LA-SY32)與嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的配伍能力較好。加入嗜酸乳桿菌LA-SYO2和鼠李糖乳桿菌LCR-SYO6制成的酸奶風(fēng)味最好。 綜合上述篩選結(jié)果，確定綜合表現(xiàn)良好的長雙歧桿菌BL-SY31和嗜酸乳桿菌LA-SY02兩個菌株作為應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的備選菌株，并對其安全性包括耐藥性和

5、遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行評價。結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌LA-SY02和長雙歧桿菌BL-SY31都具有較低的耐藥性；兩個菌株未發(fā)現(xiàn)有害物質(zhì)的代謝活性，在多次傳代后未發(fā)生這些代謝活性、生產(chǎn)性能以及耐藥性的改變，具有很好的安全性。 在乳制品生產(chǎn)中的應(yīng)用研究表明，分別應(yīng)用LA-SY02和BL-SY31制備的嗜酸乳桿菌酸奶和雙歧桿菌奶粉，在保質(zhì)期內(nèi)益生菌活菌數(shù)完全達(dá)到了國標(biāo)中規(guī)定的健康值指標(biāo)(10,'6>cfu/m1)。 本研究為開發(fā)降低膽固醇