南方養(yǎng)殖仿刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)分析及潛在益生菌的特性研究.pdf

1、近年來，益生菌產(chǎn)品的應(yīng)用作為一種高效安全的疾病預防方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到普遍使用。本研究采用高通量測序技術(shù)對大連、煙臺、霞浦和莆田4個不同地區(qū)養(yǎng)殖的仿刺參的腸道菌群結(jié)構(gòu)進行分析，比較了4個產(chǎn)地的仿刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)之間的差異；從福建霞浦和莆田地區(qū)養(yǎng)殖的仿刺參腸道內(nèi)分離培養(yǎng)得到451株菌，經(jīng)過對特定病原菌的拮抗性剖析和安全性測驗篩選出3株安全的仿刺參潛在益生菌；初步驗證了三株潛在益生菌的益生效果；將不同濃度的潛在益生菌混合在飼料中喂養(yǎng)仿刺參觀

2、察其對仿刺參特定生長率、腸道菌群結(jié)構(gòu)和非特異性免疫的影響，為益生菌在仿刺參養(yǎng)殖中的運用提供了一定的依據(jù)。
　　1、采用高通量測序技術(shù)對大連、煙臺、霞浦和莆田4個不同地區(qū)養(yǎng)殖的仿刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)進行分析。本研究通過高通量測序技術(shù)發(fā)現(xiàn)，大連池塘養(yǎng)殖仿刺參的腸道菌群以變形菌門（Proteobacteria）為主，在整個仿刺參腸道細菌群落中占60.90％。此外，擬桿菌門（Bacteroidetes）占比為25.24%。煙臺池塘養(yǎng)殖仿刺參的

3、腸道菌群以變形菌門（Proteobacteria）為主要優(yōu)勢菌群，在細菌群落中占87.48%。福建吊籠養(yǎng)殖仿刺參的腸道菌群以厚壁菌門（Firmicutes）為主，在細菌群落中占59.04%，其中主要為乳球菌屬和芽孢桿菌屬。此外，擬桿菌門（Bacteroidetes）和變形菌門（Proteobacteria）其占比分別為29.86%和8.14%，位列二、三次。采用分離培養(yǎng)法從霞浦、莆田養(yǎng)殖的仿刺參腸道中分離得到451株菌，使用16S rD

4、NA序列分析技術(shù)對這些菌株進行了分子鑒定。福建池塘養(yǎng)殖仿刺參的腸道菌群總體以厚壁菌門（Firmicutes）為主（主要為芽孢桿菌屬和乳球菌屬），其次為擬桿菌門（Bacteroidetes）和變形菌門（Proteobacteria）。在霞浦海上吊籠養(yǎng)殖的仿刺參的腸道內(nèi)經(jīng)過分離鑒定的240株菌株分別屬于三個不同的門、11個屬和34個種。在莆田池塘養(yǎng)殖仿刺參的腸道內(nèi)經(jīng)過分離鑒定的211株菌株分屬于三個不同的門、11個屬和49個種。
　　

5、2、通過對特定病原菌的拮抗性實驗，菌株CQN-2、CQN-12和CQN-39對創(chuàng)傷弧菌等病原菌具有較明顯的拮抗作用。經(jīng)鑒定，這三株菌分別為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）、地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。潛在益生菌的安全性檢驗包括藥敏分析和毒力分析兩個方面：選取7大類14種常用抗生素對潛在益生菌的藥物敏感性進行分析，通

6、過人工感染實驗驗證潛在益生菌對仿刺參成活率的影響。藥敏結(jié)果顯示，3株潛在益生菌均對50%以上常用抗生素表現(xiàn)敏感性；人工感染實驗結(jié)果表明，以105、107及109cfu/mL菌濃度的CQN-2、CQN-12、CQN-39浸浴后仿刺參的成活率均高于同濃度的塔氏弧菌處理組（陽性對照）和生理鹽水處理組（陰性對照）。
　　3、研究3株潛在益生菌對仿刺參生長、免疫和腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，以探討3株潛在益生菌的益生效果。實驗以初始體重為20±2.

7、5g（平均值±SE）的仿刺參為研究對象，在基礎(chǔ)飼料中分別添加不同劑量（0、107cfu/g或109cfu/g）的潛在益生菌，在室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)中進行了為期60d的養(yǎng)殖實驗。實驗結(jié)果表明，飼料中添加潛在益生菌能夠顯著提高仿刺參的生長速率，CQN-12在107cfu/g下混合飼料投喂仿刺參可以顯著地提高 SOD、CAT、LSZ、p105和p50在腸道內(nèi)的基因表達量，促進仿刺參的免疫能力。CQN-2在107cfu/g下混合飼料投喂仿刺參可以顯著

8、地提高SOD、CAT、LSZ、p105和p50在呼吸樹內(nèi)的基因表達量，增強仿刺參的免疫能力。兩種益生菌都是在107cfu/g下對仿刺參免疫效果顯著高于CK和109cfu/g。CQN-39在本研究中對仿刺參的免疫能力具有一定的增強作用，但是效果并不顯著。菌群結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明，CQN-2和CQN-12實驗組在投喂后可顯著降低仿刺參腸道內(nèi)弧菌水平，同時顯著提高芽孢桿菌、乳球菌的含量，而CQN-39實驗組雖然弧菌含量也得到明顯抑制，不過芽孢桿菌

9、水平未得到顯著提高，表明該菌在仿刺參腸道內(nèi)的定植效果不理想。以上結(jié)果表明，潛在益生菌CQN-2在本實驗條件下以107cfu/g菌濃度投喂添加時效果最佳，可以顯著改善仿刺參的腸道微生態(tài)環(huán)境并提高其免疫力，并以此促進仿刺參的生長。
　　綜上所述，本研究篩選得到的3株仿刺參潛在益生菌，其中CQN-12和CQN-2可以有效地改善仿刺參腸道內(nèi)環(huán)境，促進仿刺參的生長并提高其免疫力。本研究為仿刺參益生菌的研究使用提供了一定的理論依據(jù)，為益生菌在