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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:研究葡萄糖和亮氨酸對(duì)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及mTORC1信號(hào)通路在葡萄糖和亮氨基酸影響成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的作用。
方法:將小鼠皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)在含不同濃度葡萄糖及亮氨酸的培養(yǎng)基里,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,用Annexin V/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,PI法流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,7-MGTP pulldown實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞翻譯起始情況,Western blot檢測(cè)翻譯起始相關(guān)蛋白的表達(dá)及mTORC1信號(hào)通路分子的活
2、化。
結(jié)果:當(dāng)只增加培養(yǎng)基中葡萄糖濃度至15mmol/L或者增加亮氨酸濃度至24mmol/L時(shí)都會(huì)增加與7-MGTP結(jié)合的翻譯起始因子(eIF4E、eIF4G),形成的有活性的翻譯起始復(fù)合物(eIF4F)增加,mTORC1信號(hào)通路活化,促進(jìn)與蛋白質(zhì)翻譯起始過(guò)程有關(guān)蛋白分子的表達(dá),促進(jìn)L929成纖維細(xì)胞增殖(P<0.05),抑制凋亡,細(xì)胞周期停留在S期;而同時(shí)增加葡萄糖濃度至15mmol/L和亮氨基酸的濃度至24mmol/L時(shí),
3、會(huì)減少與7-MGTP結(jié)合的eIF4E和eIF4G,形成的eIF4F減少,mTORC1信號(hào)通路中與細(xì)胞增殖相關(guān)的4EBP1和與細(xì)胞生存相關(guān)的Akt的磷酸化減弱,與蛋白質(zhì)翻譯起始過(guò)程有關(guān)蛋白分子的表達(dá)下降,抑制蛋白質(zhì)翻譯起始過(guò)程,抑制成纖維細(xì)胞的增殖(P<0.05),促進(jìn)成纖維細(xì)胞的凋亡(P<0.05),細(xì)胞周期被阻滯在G1期。
結(jié)論:一定范圍內(nèi)增加葡萄糖和亮氨酸的濃度會(huì)活化細(xì)胞內(nèi)mTORC1信號(hào)通路,促進(jìn)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng),
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