IL-17A通過EphrinB2信號通路抑制小鼠心臟成纖維細胞的激活.pdf

1、目的：
　　心肌纖維化是心室重塑的重要病理基礎，IL-17A參與心肌纖維化，但機制尚未闡明，EphrinB2信號通路參與腎臟的纖維化，但其是否在心肌纖維化中起作用還未見報道。我們的預實驗發(fā)現(xiàn)IL-17A可以降低心臟成纖維細胞EphrinB2的表達，因此，本研究旨在觀察IL-17A是否通過EphrinB2信號通路參與了心臟成纖維細胞的激活。
　　方法：
　　應用酶消化及差速貼壁法分離培養(yǎng)新生小鼠原代心臟成纖維細胞，并應用

2、vimentin、CD31、troponin T、SM myosin抗體進行免疫熒光染色鑒定培養(yǎng)的心臟成纖維細胞。免疫熒光法用于檢測心臟成纖維細胞EphrinB2的表達。實驗分為對照組、慢病毒陰性組、慢病毒感染組，IL-17A組，慢病毒陰性對照+IL-17A組、慢病毒感染組+IL-17A組。用CCK8及劃痕試驗檢測小鼠心臟成纖維細胞的增殖及遷移能力，實時熒光定量PCR(real-time PCR)及Western blot檢測α-SMA

3、、Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達情況。各組實驗均獨立重復3次，實驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準誤（(x)±SE）表示，兩組樣本平均數(shù)比較時用t檢驗，多組數(shù)據(jù)間比較采用ANOVA(方差分析)，應用SPSS19.0作統(tǒng)計分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　體外分離培養(yǎng)的小鼠心臟成纖維細胞經免疫熒光染色vimentin(+)、CD31(-)、troponin T（-）、SM myosin(-)，純度在95％以上，且小鼠心臟成纖維細胞

4、大量表達EphrinB2; IL-17A（100ng/ml）處理24h后，小鼠心臟成纖維細胞的增殖遷移能力、α-SMA的表達和Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均較對照組顯著降低。與此同時，EphrirB2表達也較對照組明顯下降;慢病毒感染沉默EphrinB2基因后，心臟成纖維細胞的增殖遷移能力、α-SMA表達及膠原合成均較對照組顯著降低，而EphrinB2基因過表達后結果則相反。EphrinB2基因沉默的心臟成纖維細胞IL-17A處理組即efnb2-

5、shRNA+IL-17A與對照組即scramble+IL-17A組、control+IL-17A組相比，小鼠心臟成纖維細胞的增殖遷移能力、α-SMA的表達及Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均進一步降低。而EphrinB2過表達的心臟成纖維細胞IL-17A處理組即lenti-efnb2+IL-17A與對照組vector+IL-17A、control+IL-17A相比，逆轉了IL-17A對小鼠心臟成纖維細胞的抑制作用。
　　結論：
　　IL-