大腸桿菌EF-Tu多蛋白復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究.pdf

1、細(xì)菌延伸因子Tu(elongation factor Tu，EF—Tu)是一種高豐度蛋白，在蛋白質(zhì)生物合成的延伸過(guò)程中起到了關(guān)鍵性的作用。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)EF—Tu可以作為一種新的病原相關(guān)分子模式(Pathogen—associated molecular patterns，PAMPs)分子而被宿主識(shí)別。作為一個(gè)具有高度保守性的細(xì)菌蛋白質(zhì)，它是如何被宿主細(xì)胞所特異性地識(shí)別并進(jìn)而引發(fā)宿主的哪些免疫應(yīng)答反應(yīng)。這無(wú)疑具有著非常重要的生物學(xué)意義。

2、 本實(shí)驗(yàn)首先采用分子克隆和抗體制備技術(shù)，以模式生物大腸桿菌K12為實(shí)驗(yàn)材料從其基因組中克隆出細(xì)菌延伸因子EF—Tu并制備其抗體。然后在本實(shí)驗(yàn)室之前研究EF—Tu多蛋白復(fù)合物的基礎(chǔ)上表達(dá)并純化了EF—Tu多蛋白復(fù)合物中OmpA、EF—Tu和OmpF三個(gè)蛋白組份。接著采用Western blotting和激光共聚焦證明了OmpA、EF—Tu和OmpF三個(gè)蛋白與人單核巨噬細(xì)胞THP—1有相互作用并被細(xì)胞膜受體識(shí)別而定位于細(xì)胞膜上。最后運(yùn)

3、用酶聯(lián)反應(yīng)吸附試驗(yàn)技術(shù)對(duì)EF—Tu多蛋白復(fù)合物所引發(fā)人單核巨噬細(xì)胞THP—1細(xì)胞的免疫反應(yīng)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)EF—Tu多蛋白復(fù)合物中各蛋白組份可以明顯促使THP—1細(xì)胞細(xì)胞因子IL-1β、IL—8、IL-10、IL-12和TNF—α分泌量的增多。同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)EF—Tu多蛋白復(fù)合物中各蛋白組份可以顯著提高人單核巨噬細(xì)胞THP—1細(xì)胞的噬菌能力并具有劑量依賴效應(yīng)。 上述研究首次發(fā)現(xiàn)了EF—Tu多蛋白復(fù)合體可以作為一種新型病原相