基于組學(xué)研究對(duì)致病性鉤體毒力因子及免疫靶標(biāo)的分析.pdf

1、鉤端螺旋體病是由致病性鉤端螺旋體引起的一種全球范圍內(nèi)的人獸共患病，感染鉤端螺旋體可引起黃疸、發(fā)熱、出血以及急性的多器官衰竭等危害，其嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康，與此同時(shí)也對(duì)畜牧業(yè)造成了極大的損失。
　　由于鉤體特殊的進(jìn)化地位以及有效遺傳操作系統(tǒng)的缺乏，人們對(duì)于鉤體及鉤體病的研究進(jìn)展一直十分緩慢，鉤體的主要致病因子及致病機(jī)制仍不明確，亦缺乏相應(yīng)的診斷及疫苗靶標(biāo)。直到2003年第一株鉤體全基因組測(cè)序數(shù)據(jù)的報(bào)道，基于全基因組測(cè)序技術(shù)的相應(yīng)研究

2、不斷為人們對(duì)于鉤體生理、代謝以及致病機(jī)制的研究和認(rèn)識(shí)提供新的方法和視野。
　　本論文基于對(duì)我國(guó)致病性鉤體主要血清群代表株的基因組測(cè)序研究，初步探討了鉤體不同血清群泛基因組的組成，并以核心基因組為基礎(chǔ)進(jìn)一步分析了這些血清群間的進(jìn)化關(guān)系。另外，通過(guò)454焦磷酸測(cè)序并結(jié)合Sanger測(cè)序技術(shù)，完成了我國(guó)鉤體疫苗株56610(401)株的全基因組測(cè)序研究，鑒定出了其染色體外環(huán)狀質(zhì)粒的存在以及特異的O抗原編碼區(qū)域。結(jié)合課題組已經(jīng)完成全基因組

3、測(cè)序的另一株鉤體疫苗菌株56603(Gui44)株以及國(guó)際上已公布的6株鉤體（4株強(qiáng)毒及2株腐生型鉤體）全基因組測(cè)序數(shù)據(jù)，我們也對(duì)8株不同毒力的鉤體全基因組進(jìn)行了比較分析。通過(guò)對(duì)致病性菌株特有基因的篩選，預(yù)測(cè)到20個(gè)潛在的核心毒力編碼基因。
　　在全基因組測(cè)序的基礎(chǔ)上，我們完成了問(wèn)號(hào)鉤體56601株、56603(Gui44)株及56610(401)株的表面暴露蛋白質(zhì)組質(zhì)譜鑒定，結(jié)合優(yōu)化的表面暴露蛋白預(yù)測(cè)策略共篩選的81個(gè)核心表面暴

4、露蛋白、61個(gè)非必需表面暴露蛋白以及122個(gè)特異表面暴露蛋白。另外，我們?cè)诜置诘鞍踪|(zhì)組內(nèi)篩選到一個(gè)保守存在的蛋白-硫醇過(guò)氧化物酶。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，由基因LA0862編碼的鉤體硫醇過(guò)氧化物酶可以通過(guò)非典型的分泌途徑分泌到胞外，在鉤體與宿主相互作用的過(guò)程中，保護(hù)鉤體免受外源過(guò)氧化物壓力的威脅。重組表達(dá)的鉤體硫醇過(guò)氧化物酶刺激產(chǎn)生的抗體與致病性鉤體具有較好的交叉免疫反應(yīng)，鉤體硫醇過(guò)氧化物酶和鉤體免疫的動(dòng)物血清也可以發(fā)生反應(yīng)，這說(shuō)明LA0862可