紫芝胞外多糖蛋白復(fù)合物的制備提純與生物活性研究.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命的常見病和多發(fā)病之一,全世界每年有1000多萬新病例和600多萬人死亡,其死亡率列居第二,僅次于心血管疾病。目前的研究已經(jīng)證實,靈芝多糖肽具有明顯的抗新生血管形成活性,對腫瘤細胞的生長也有著一定的抑制作用,并且相對于多糖,有著口服有效性,在抗腫瘤研究的將來有著十分廣闊的前景。紫芝與赤芝同屬,是我國的特有種類,國內(nèi)外對它的研究報道甚少。
　　 本研究項目在前期研究的基礎(chǔ)之上,進一步完善靈芝抗腫瘤的研究。對紫芝

2、菌株的深層發(fā)酵液配方進行了優(yōu)化,通過單次單因素和正交實驗,確定了其最佳深層液體發(fā)酵培養(yǎng)基組分為:(w／v):葡萄糖3.5％,蛋白胨0.3％,酵母粉0.1％,KH2PO40.1％,MgSO40.05％,維生素B10.005％；最適發(fā)酵培養(yǎng)條件為:28℃,160rpm／min,裝液量150ml,培養(yǎng)14d后菌株生長狀態(tài)最好,菌絲體產(chǎn)率可達6.7g／L。對發(fā)酵液上清進行脫除游離蛋白的處理,分別采用兩種方法,不同濃度的TCA和(NH4)2SO4

3、鹽析結(jié)果顯示,蛋白質(zhì)的洗脫率和多糖的損失率均與TCA和(NH4)2SO4濃度呈正相關(guān)。10％的TCA濃度時蛋白洗脫率達到70％以上,SDS-PAGE電泳結(jié)果也間接地證實了這一點。但同時,多糖的損失率也隨著蛋白洗脫率的增加而增加；PAS染色能看到很明顯的紅色條帶,說明多糖損失較多,超過25％。而90％濃度的(NH4)2SO4能夠洗掉絕大部分的蛋白,并且控制多糖損失在20％以內(nèi)。有利于接下來的分離純化步驟。發(fā)酵上清液經(jīng)過90％濃度的(NH4