鹽脅迫對(duì)發(fā)菜胞外多糖結(jié)構(gòu)及生物活性的影響.pdf

1、發(fā)菜胞外多糖是發(fā)菜藻體代謝產(chǎn)生的一種酸性雜多糖，是極具開發(fā)潛力的天然藥物資源。發(fā)菜具有鹽耐受保護(hù)機(jī)制，在鹽脅迫環(huán)境中，發(fā)菜胞外多糖的分泌量會(huì)顯著增多，其結(jié)構(gòu)和活性也發(fā)生了改變。本課題旨在探究不同鹽濃度脅迫培養(yǎng)對(duì)發(fā)菜胞外多糖結(jié)構(gòu)和活性的影響，從而為發(fā)菜的抗逆保護(hù)機(jī)制提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。主要研究結(jié)果如下：
　　1.鹽脅迫下的發(fā)菜細(xì)胞較正常培養(yǎng)的細(xì)胞顏色變淺變黃，細(xì)胞鏈彎曲纏繞呈團(tuán)聚式生長(zhǎng)，異形胞增多，細(xì)胞壁外膠鞘結(jié)構(gòu)增厚，胞外多糖

2、分泌量明顯提高，0.1、0.3 mol/L NaCl培養(yǎng)較正常培養(yǎng)的多糖分泌量分別提高了27.6％、45.0％。對(duì)不同鹽濃度下的發(fā)菜胞外多糖進(jìn)行提取純化，發(fā)現(xiàn)其成分均一，純化后多糖含量均達(dá)80％左右。
　　2.紅外光譜分析可知，正常培養(yǎng)發(fā)菜胞外多糖(NEPS)、0.1 mol/L NaCl鹽脅迫多糖(0.1M-YEPS)和0.3 mol/L NaCl鹽脅迫多糖(0.3M-YEPS)均具有明顯的多糖特征吸收峰，鹽脅迫培養(yǎng)的胞外多糖與

3、NEPS相比，羥基和羧基的伸縮振動(dòng)峰明顯減弱甚至消失。不同鹽濃度下的發(fā)菜胞外多糖均為低分子量多糖，組分均一。0.3M-YEPS存在4種糖苷鍵連接方式，-5)Ara(1-、Aa(1-、-3)Gal（1-和Gal(1-，可以推斷阿拉伯糖和半乳糖位于支鏈上。
　　3.抗氧化分析結(jié)果表明，鹽脅迫能顯著提高發(fā)菜胞外多糖的抗氧化能力。0.1M-YEPS、0.3M-YEPS的氧自由基清除能力ORAC值分別為NEPS的2倍、2.5倍。NEPS、0

4、.1M-YEPS、0.3M-YEPS對(duì)DPPH·自由基、ABTS+·自由基的清除能力依次增強(qiáng)，并且呈現(xiàn)出了量效關(guān)系。
　　4.不同鹽濃度下的發(fā)菜胞外多糖在一定的時(shí)間和濃度范圍內(nèi)，對(duì)腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出增殖抑制作用，并且呈劑量依賴性。0.3M-YEPS對(duì)HT-29細(xì)胞的IC50值為2.81mg/mL，NEPS、0.1M-YEPS在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)抑制率未達(dá)到50％;0.1M-YEPS、0.3M-YEPS對(duì)LoVo細(xì)胞的如0值分別為2.96

5、mg/mL、2.37mzg/mL，NEPS在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)抑制率未達(dá)到50％，說明鹽脅迫可以提高發(fā)菜胞外多糖的抗腫瘤活性。
　　5.發(fā)菜胞外多糖免疫活性的研究表明，NEPS不能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖，0.1M-YEPS、0.3M-YEPS在一定的濃度范圍內(nèi)能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖，并且可以增強(qiáng)細(xì)胞吞噬中性紅能力。不同鹽濃度下的發(fā)菜胞外多糖均可以提高 RAW264.7細(xì)胞內(nèi)的SOD活力，且0.3M-YEPS作用下的S