1、奶牛乳腺炎是奶牛的多發(fā)病和造成損失最為嚴(yán)重的疾病之一，而且還給人類的健康帶來了潛在的危害。目前，引起奶牛乳腺炎的病原菌眾多，且治療時大量抗生素的使用不但使奶牛對病原菌產(chǎn)生抗性，而且抗生素的殘留問題也日益影響著食品衛(wèi)生安全和人類健康等問題。利用疫苗來預(yù)防和控制奶牛乳腺炎是一種安全、經(jīng)濟(jì)、有效的方法。本課題針對引起奶牛乳腺炎的主要致病菌進(jìn)行了分離鑒定，并制備了三聯(lián)滅活苗，通過不同的試驗動物從免疫佐劑和免疫途徑的方面進(jìn)行了疫苗的免疫效力評價。
2、本研究內(nèi)容分為四部分： 試驗一奶牛乳腺炎主要致病菌的分離鑒定與致病性分析本試驗對山東省濟(jì)南、泰安和臨沂等地區(qū)5個奶牛場的160份乳樣進(jìn)行了臨床型乳腺炎和隱性乳腺炎的判定檢測，并結(jié)合常規(guī)生化鑒定與PCR鑒定方法對所采集乳樣的主要致病菌進(jìn)行了分離鑒定。結(jié)果表明，160份乳樣中有127份呈乳腺炎陽性，其中臨床型乳腺炎占36.22％，隱性乳腺炎占63.18％；從這些乳樣中分離到了主要致病菌金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌，金黃色葡萄
3、球菌依據(jù)溶血型的不同主要有α溶血、β溶血、α+β溶血和不溶血這四種；大腸桿菌依據(jù)O抗原診斷血清得出主要有O<,2>、O<,21>、O<'76>和O<,88>這四種型；無乳鏈球菌依據(jù)溶血型主要為β溶血型。并且對主要病原菌進(jìn)行了致病性分析，篩選出典型的致病性較強(qiáng)的菌株。 試驗二奶牛乳腺炎三聯(lián)滅活苗的制備與實驗室免疫效力評價本試驗從乳腺炎患病奶牛乳樣中分離到典型的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌，并研制出這三種菌的奶牛乳腺炎三聯(lián)滅
4、活疫苗。為了初步評估該疫苗的免疫效力，在小白鼠上進(jìn)行了免疫攻毒試驗，用間接ELISA法檢測了小白鼠的抗體水平，結(jié)果表明，此疫苗具有較好的免疫性，與對照組相比，顯著提高了小白鼠的抗體效價(P<0.01)，提高了小白鼠抵抗多種病原菌侵襲的能力，免疫保護(hù)率平均達(dá)到73.3％。 試驗三不同免疫佐劑的三聯(lián)滅活苗的免疫效力評價本試驗旨在通過不同免疫佐劑疫苗的效力比較，篩選出較為實用、安全、有效的佐劑疫苗。本試驗以新西蘭白兔和荷斯坦奶牛為試驗
5、動物，分別用油乳佐劑苗和鋁膠佐劑苗進(jìn)行了免疫試驗，比較兩種佐劑疫苗的免疫效力，結(jié)果表明，油乳佐劑苗和鋁膠佐劑苗都能提高機(jī)體的免疫力，顯著提高(P<0.01)血清中的抗體水平，但油乳佐劑苗比鋁膠佐劑苗更能顯著提高(P<0.01)血清中的抗體水平，并且能夠維持較長時間的高抗體水平，顯著降低奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)，而且油乳佐劑苗穩(wěn)定性較好，價格低廉，易于在生產(chǎn)實踐中大量應(yīng)用。試驗四三聯(lián)滅活苗在不同的免疫途徑下的免疫效力評價本試驗旨在通過對奶牛乳
6、腺炎三聯(lián)滅活苗在后海穴注射免疫與常規(guī)注射免疫的效力比較，尋找更為有效、方便的免疫途徑。本試驗以荷斯坦奶牛為試驗動物，分別在后海穴、臀肌和皮下接種乳腺炎滅活疫苗，比較其免疫效力，結(jié)果表明，后海穴免疫首先能節(jié)省疫苗用量，同時還可以提前產(chǎn)生堅強(qiáng)免疫力，顯著提高(P<0.01)血清中的抗體水平，維持較長時間的高抗體水平；其次接種疫苗時因針刺穴位的作用，顯著提高了血液中的白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)，增強(qiáng)了免疫細(xì)胞的功能；‘最后顯著降低(P<0.01)