表皮生長因子受體活化與胰腺癌細胞解離關系的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名： 奎魚 日期： 三! ! !

2、：苧：蘭羅中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權使用授權書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產權的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產權單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容( 保密內容除外) ，以采用影印、縮印或

3、其他手段保存論文。名名期簽簽 者師 作教 文導論指日·中文論著摘要·表皮生長因子受體的活化與胰腺癌細胞解離之間的關系目的本研究通過分析胰腺癌細胞系中表皮生長因子受體( E G F R ) 、磷酸化E G F R( p ．E G F R ) 和其下游激酶M E K l ／2 、E R K l ／2 的表達，進一步闡述胰腺癌細胞解離的分子機制。方法本研究采用2 種倉鼠胰腺癌細胞系——高侵襲潛能的P C ．1 ．0 和低侵

4、襲潛能的P C 一1 細胞；也采用2 種人胰腺癌細胞系——高侵襲潛能的A s P C ．1 和低侵襲潛能的C a p a n ．2 細胞。上述細胞系均以R P M I ．1 6 4 0 培養(yǎng)液( G i b c o ．B R L ，G r a n d I s l a n d ，N Y ) 培養(yǎng)，并加1 0 ％胎牛血清( B i o s e r u m ，V i c t o r i a ，A u s t r a l i a ) 、1 0

5、0 U ／m L 青霉素G 和1 0 0P g ／m L 鏈霉素，于3 7 ℃含5 ％C 0 2 的孵箱內培養(yǎng)。本研究采用兔多克隆抗體作用于人E G F R ，p - M E K l ／2 ，p - E R K l ／2 的氨基酸序列( S a n t a C r u zB i o t e c h n o l o g y ，S a n t aC r u z ，C A ) 、以及山羊多克隆抗體作用于人p - E G F R 的氨基酸序列(

6、 S a n t aC r u zB i o t e c h n o l o g y ，S a n t a C r u z ，C A ) ，也利用異硫氰酸熒光素( f l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e ，F(xiàn) I T C ) 和若丹明標記的熒光第二抗體( S a n t aC r u zB i o t e c h n o l o g y ) 。將上述4 種細胞系種植在室玻片上，

7、并培養(yǎng)3 6 h 。為了評價這些胰腺癌細胞中E G F R 、p - E G F R 、p - M E K l ／2 和p - E R K l ／2 表達的變化，加入P C ．1 ．0細胞的培養(yǎng)液( 含解離因子D F ，D F ．C M ) 和A G l 4 7 8 - 特異性E G F R 抑制劑( C a l b i o c h e m ，D a r m s t a d t ，G e r m a n y ) 。在活化實驗中，將P C

8、 ．1 和C a p a n - 2 細胞加入到含有4 0 ％D F —C M 的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3 6h 。抑制實驗中，在P C ．1 ．0 和A s P C ．1細胞培養(yǎng)液中加入1 0p MA G l 4 7 8 。另外，P C ．1 和C a p a n ．2 細胞經(jīng)D F —C M 培養(yǎng)3 6h 后再繼續(xù)用1 0 l a M A G l 4 7 8 培養(yǎng)3 6 h 。培養(yǎng)后，在室溫下以O ．5 ％多聚甲醛固定1 0 m i n ，再