β-防御素(DEFB4)基因拷貝數(shù)變異與漢族強(qiáng)直性脊柱炎關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的：
　　1.探討β-防御素(DEFB4)基因拷貝數(shù)變異(Copy Number Variation，CNV)與強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)性；
　　2.探討基因CNV是否會(huì)影響疾病的嚴(yán)重程度，同時(shí)研究與基因CNV在疾病發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中相互影響的環(huán)境因素，為進(jìn)一步探索AS的發(fā)病原因，闡明AS的發(fā)病機(jī)制提供重要線索和依據(jù)。
　　方法：
　　1.2011～20

2、14年，收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門(mén)診確診的AS患者作為病例組，同時(shí)期按性別、年齡成組匹配，來(lái)安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心體檢的健康者為對(duì)照組，采用面對(duì)面問(wèn)卷調(diào)查法，用課題組自行設(shè)計(jì)的調(diào)查問(wèn)卷，收集患者和對(duì)照者的人口學(xué)資料：年齡、性別、文化水平、個(gè)人的行為習(xí)慣(吸煙、飲酒等)和飲食偏好，以及患者的臨床資料：病程、癥狀持續(xù)時(shí)間、BASDAI疾病活動(dòng)指數(shù)和BASFI功能指數(shù)；實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)指標(biāo)：血沉、C反應(yīng)蛋白和HLA-B27

3、等。在調(diào)查的同時(shí)采集患者和對(duì)照者的5ml外周血。
　　2. DNA提取采用修改后的鹽析法，選取具有高度重復(fù)區(qū)域的兩個(gè)DEFB4基因片段(DEFB4_1和DEFB4_2)，拷貝數(shù)的檢測(cè)采用AccuCopyTM法。
　　3.采用病例對(duì)照以及單純病例研究設(shè)計(jì)，分析比較DEFB4基因中CNV在 AS患者和對(duì)照者中的差異，采用logistic回歸模型分析基因CNV與疾病、疾病的嚴(yán)重程度間的關(guān)聯(lián)性，用單純病例研究方法分析CNV與環(huán)境的交

4、互作用。
　　4.數(shù)據(jù)錄入軟件為Epidata3.1，采用雙人錄入并進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件實(shí)現(xiàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.共納入806例研究對(duì)象，病例組405人，男性338人，平均年齡為27.91±8.93歲，中位病程為2.08年，HLA-B27陽(yáng)性率為64％；對(duì)照組401人，男性324人，平均年齡為26.89±7.12歲。兩組研究對(duì)象在性別(χ2=1.13，P=

5、0.288)和年齡(t=1.77，P=0.076)上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2. DEFB4基因拷貝數(shù)的分布：AS患者，基因拷貝數(shù)范圍為1～8，DEFB4_1主要為2~4拷貝，DEFB4_2主要為2～5拷貝。對(duì)照組拷貝數(shù)范圍和病例組相同，DEFB4_1和DEFB4_2最多的拷貝均為3拷貝，分別占34.34%和27.14%。DEFB4_1(Z=0.63，P=0.528)和DEFB4_2(Z=1.27，P=0.111)拷貝數(shù)分布在病例

6、組和對(duì)照組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.以3拷貝為界分兩組分析，DEFB4_2拷貝數(shù)在病例組和對(duì)照組中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.49，P=0.034)，高拷貝數(shù)組(≥4)人群是低拷貝數(shù)組(≤3)人群可能患AS風(fēng)險(xiǎn)的0.74倍，95%CI(0.56，0.98)。進(jìn)一步分為三組：低拷貝數(shù)組(≤2)，中拷貝數(shù)組(3)，高拷貝數(shù)組(≥4)，病例組和對(duì)照組拷貝數(shù)分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=8.68，P=0.013；與3拷貝數(shù)組比較，

7、低拷貝數(shù)組和高拷貝數(shù)組人群分別是中拷貝數(shù)組人群可能患AS風(fēng)險(xiǎn)的0.68和0.62倍，但調(diào)整年齡和性別后，低拷貝數(shù)組與中拷貝數(shù)組比OR=0.69，95%CI(0.47，1.03)，P=0.067，降低患AS風(fēng)險(xiǎn)的可能性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4. DEFB4_1和DEFB4_2拷貝數(shù)的增加是疾病嚴(yán)重度(BASDAI)增加的保護(hù)因素，OR，95%CI分別為0.71(0.56，0.90)和0.75(0.60，0.94)，調(diào)整年齡、性別、病程

8、之后，影響改變不大。未發(fā)現(xiàn)DEFB4基因CNV與身體功能(BASFI)的關(guān)聯(lián)性。
　　5. DEFB4_1：食鹽口味中等的病人與食鹽口味輕的病人相比，基因×環(huán)境交互作用OR=0.51，95%CI(0.28，0.94)，P=0.032，其他環(huán)境因素并未發(fā)現(xiàn)與基因的交互作用。DEFB4_2未發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)變異與環(huán)境的交互作用。
　　結(jié)論：
　　DEFB4基因高拷貝數(shù)(≥4)是AS發(fā)病的保護(hù)因素，并且獨(dú)立于年齡和性別；基因CNV