芽胞桿菌分類學(xué)特征及其生防功能菌株篩選.pdf

1、本研究對從德國和瑞典菌種保存中心引進(jìn)的50芽胞桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，活化并進(jìn)行冷凍干燥保存。并對保存的菌種進(jìn)行了質(zhì)量檢測，結(jié)果表明冷凍干燥保存的芽胞桿菌活菌數(shù)高，純度好。
　　 通過形態(tài)特征、生理生化特征、16S rRNA測序鑒定、脂肪酸分析等方法，對芽胞桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行分類學(xué)的研究。
　　 針對14種生化分類性狀對芽胞桿菌進(jìn)行生化鑒定，數(shù)值聚類分析結(jié)果表明在65％的水平下將芽胞桿菌分為6大聚類組。大多數(shù)芽胞桿菌接觸酶反應(yīng)、氧化

2、酶反應(yīng)、葡萄糖發(fā)酵、淀粉水解等呈陽性，而吲哚反應(yīng)、檸檬酸反應(yīng)、硫化氫反應(yīng)等呈陰性。
　　 制出芽胞桿菌16sRNA系統(tǒng)發(fā)育樹，聚類分析結(jié)果將芽胞桿菌分為5大聚類。經(jīng)16S rRNA序列同源性比較發(fā)現(xiàn)，GroupⅠ中蠟狀芽胞桿菌(Bacillus．cereus)，蕈狀芽胞桿菌(Bacillus mycoides)，蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)同源性在98％以上，簡單芽胞桿菌(Bacillus si

3、mplex)與嗜冷芽胞桿菌(Bacillus psychrosaccharolyticus)同源性100％，彎曲芽胞桿菌(Bacillus flexus)與巨大芽胞桿菌(Bacillus megaterium)同源性100％，GroupⅡ中有枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)與解纖維芽胞桿菌(Bacillus cellulosilyticus)同源性100％。GroupⅣ包括Bacillus farraginis，Bac

4、illus ordii，Bacillus fortis同源性在97％以上。GroupⅤ包括梭形芽胞桿菌(Bacillus fusiformis)與球形芽胞桿菌(Bacillus sphaencus)同源性100％，巴斯德氏芽胞桿菌(Bacillus pasteurii)與嗜冷芽胞桿菌(Bacillus．psychrophilus)同源性在97％以上。GmupⅥ中包括Bacillus agaadhaerens，Bacillus clark

5、ii同源性100％。中孢芽胞桿菌(Bacillus centrosporus)與溶硫胺芽胞桿菌(Bacillusthiaminolyticus)同源性在98％以上。
　　 芽胞桿菌脂肪酸組成中均有15：0 ISO，另外14：0、15：0 ANTEISO、17：0 ANTEISO、17：0 ISO也存在大部分芽胞桿菌中，通過脂肪酸生物標(biāo)記聚類分析將芽胞桿菌分為五大類，與16 rRNA聚類分組比較發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AME聚類分析結(jié)果與16S

6、rRNA聚類分析結(jié)果有一定的一致性．
　　 本文初步研究芽胞桿菌對大腸桿菌，青枯雷爾氏菌，香蕉枯萎病病原菌的拮抗作用，篩選出對青枯雷爾氏菌有拮抗作用的芽胞桿菌有11株，其中有較強(qiáng)抑制作用的有深褐芽胞桿菌(Bacillusatrophaeus)，蕈狀芽胞桿菌(Bacillus mycoides)，冷解糖芽胞桿菌(Bacilluspsychrosaccharolyticus)，史氏芽胞桿菌(Bacillus smithii)，球形芽

7、胞桿菌(Bacillus sphaericus)，溶淀粉類芽胞桿菌(Paenibacillus amylolyticus)，內(nèi)生芽胞桿菌(Bacillus endophyticus)。蜂房芽胞桿菌(Paenibacillus alvei)。對大腸桿菌有拮抗作用的有11株，有較強(qiáng)抑制作用的拮抗菌有緩慢芽胞桿菌(Bacillus atrophaeus)，枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)，蘇云金芽胞桿菌(Bacillusth