動物源性大腸桿菌主要耐藥基因的克隆及其同源性研究.pdf

1、抗生素在大腸桿菌病預防及治療方面有著不可替代的作用，但是隨著抗生素的不恰當使用，由耐藥菌株引起的人及動物感染性疾病不斷增加，大腸桿菌耐藥及多重耐藥現(xiàn)象已十分嚴重。 為檢測大腸桿菌的耐藥水平，為大腸桿菌耐藥基因檢測芯片的研制提供陽性樣本，解決大腸桿菌耐藥性快速檢測問題，我們從吉林省長春、通化、白城、梅河、延邊和四平采集的疑似大腸桿菌病致死的雞源、豬源、犬源和貓源病料樣本96份。對采集樣本進行分離、鑒定，獲得大腸桿菌62株。

2、 采用平皿二倍稀釋法對隨機選取的20株大腸桿菌進行了針對諾氟沙星、慶大霉素、復方新諾明、強力霉素、氟苯尼考五種代表性藥物的耐藥性檢測。受檢大腸桿菌對喹諾酮類藥物均耐藥，其中高度耐藥菌株6株；對氨基糖苷類藥物耐藥菌株19株，其中高度耐藥菌株12株；對磺胺類藥物耐藥菌株20株，全部表現(xiàn)為高度耐藥；對四環(huán)素類藥物耐藥菌株14株，其中高度耐藥菌株11株；對氯霉素類藥物耐藥菌株l株。其中，對3種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為5株，占受檢菌株的25％；對

3、4種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為13株，占受檢菌株的65％；對5種抗菌藥物耐藥的大腸桿菌為1株，占受檢菌株的5％。監(jiān)測結(jié)果表明，當前大腸桿菌耐藥特點表現(xiàn)為高度耐藥、多重交叉耐藥。 針對大腸桿菌主要耐藥性基因GyrA、GyrB、ParC、AacC4、Sul2和TetA設(shè)計相應(yīng)的特異性引物，進行PCR擴增，并對PCR產(chǎn)物進行克隆和測序，應(yīng)用Clustalxl.83軟件、MEGA3.1軟件對測得序列分析。大腸桿菌5號菌株GyrA基因83位

4、Ser突變?yōu)長eu，87位Asp突變?yōu)锳sn；其ParC基因80 Ser位突變?yōu)镮le；NCBI-BLAST檢索，PCR擴增片段與大腸桿菌同源性達98％以上；表明5號菌株GyrA基因可為大腸桿菌對喹諾酮類耐藥基因檢測芯片所用陽性樣本的制備提供參考。大腸桿菌078<'R>號菌株攜帶的AacC4基因，9號菌株、14號菌株、JX<'11>號菌株攜帶的Sul2基因和E<,1>R號菌株攜帶的TetA基因，分別可為制備大腸桿菌對氨基糖苷類藥物、磺胺

5、類藥物和四環(huán)素類藥物耐藥基因檢測芯片提供陽性樣本。 對臨床分離大腸桿菌耐藥基因的序列分析結(jié)果還表明，大腸桿菌對喹諾酮類藥物高度耐藥的078<'R>號菌株GyrA基因的83位氨基酸發(fā)生突變、104位Asp被Gly取代、181位Asn被Asp取代，但87位氨基酸未發(fā)生突變；大腸桿菌對喹諾酮類藥物低度耐藥的8號菌株GyrA基因只發(fā)生一個氨基酸突變時，ParC基因也發(fā)生突變(80Ser→Ile)；上述兩種耐藥基因的突變特點未見相關(guān)文獻報