利用AFLP分子標(biāo)記分析草莓的遺傳多樣性.pdf

1、草莓是一種薔薇科草莓屬(Fragaria)多年生草本植物，對其種質(zhì)資源的分類涉及形態(tài)學(xué)、孢粉學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域，經(jīng)歷了從形態(tài)多樣性到DNA多樣性的發(fā)展過程。由于分類標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，分類手段的局限性，導(dǎo)致了分類結(jié)果的不一致。部分品種來源不明，同名異物及同物異名現(xiàn)象十分普遍，阻礙了草莓種質(zhì)資源的研究和品種的選育。AFLP分子標(biāo)記具有高效、穩(wěn)定、可靠的特點，已廣泛應(yīng)用于品種鑒定、遺傳多樣性分析、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建等方面。本研究在建立適合

2、AFLP銀染技術(shù)體系的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了52份草莓供試樣品的樹狀圖，并對其遺傳多樣性進行了分析。主要結(jié)果如下： 1．確定了適于AFLP分析的草莓基因組DNA的提取方法(改良CTAB法)，其提取液成分為：基本提取液(100mmol/L Tris-HCl，20mmol/LEDTA，1.4mol/L NaCl，2％CTAB)中添加1％PVP-40、1％Vc、10mmol/LNa<,2>S<,2>O<,5>和2％β-巰基乙醇等防酚抗氧化物質(zhì)

3、。粗提后的DNA經(jīng)RNase酶除去RNA，苯酚/氯仿抽提一次，氯仿/異戊醇抽提一次，無水乙醇沉淀，得到了RNA去除徹底、純度高、質(zhì)量好的草莓基因組DNA。 2．建立了適于草莓分析的AFLP銀染技術(shù)體系：采用由稀有堿基切點酶MseI和常見堿基切點酶EcoRI同時進行酶切，MseI和EcoRI的用量各為3U，酶切時間以37℃下酶切4小時為最佳：加入接頭后，37℃連接10h以上(或過夜)；連接產(chǎn)物稀釋10倍后進行預(yù)擴增；預(yù)擴增產(chǎn)物稀釋

4、10倍后再進行選擇性擴增；加10μL Loading buffer，95℃變性10min，立即冰?。辉?％變性聚丙烯酞胺凝膠上進行電泳分析；銀染法檢測PCR產(chǎn)物。 3．從90對引物組合中篩選出15對多態(tài)性高、條帶清晰、分布均勻的引物組合用于材料分析，共擴增出可統(tǒng)計條帶851條，平均每對引物擴增帶數(shù)為56條。其中多態(tài)性條帶583條，占總帶數(shù)的68.5％。 4．應(yīng)用NTSYSpc2.10軟件計算相似系數(shù)介于0.533～0.9