華北八寶組織培養(yǎng)及其黃酮類化合物成分研究.pdf

1、華北八寶[Hylotelephium tatarinowii(Maxim.)H.Ohba],又稱華北景天,是景天科八寶屬的多年生草本植物,屬于我國(guó)的名貴香草植物。
　　 八寶屬(Hylotelephium)中大部分植物都具有祛風(fēng)清熱、活血化瘀、解毒消腫的功效,且目前對(duì)于八寶屬藥用植物的成分分析多集中于黃酮類物質(zhì)。
　　 由于華北八寶屬于高海拔地區(qū)植物,目前可利用的野生資源較少,因此為擴(kuò)大種源,可以采用組織培養(yǎng)的方法對(duì)其進(jìn)

2、行大量快速繁殖,而對(duì)于華北八寶的組織培養(yǎng)研究目前還未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本論文以華北八寶的幼嫩葉片作為外植體,探討了不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及不同濃度的配比對(duì)愈傷組織、不定芽分化以及生根的誘導(dǎo)效應(yīng),建立了華北八寶的組織培養(yǎng)再生體系。采用紫外分光光度法及高效液相色譜法對(duì)培養(yǎng)出的愈傷組織和再生苗進(jìn)行黃酮類化合物的分析與測(cè)定。本研究為華北八寶的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與利用提供了理論依據(jù)。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1.以華北八寶幼嫩

3、葉片為外植體,分別接種于附加不同濃度的2,4-D、NAA、6-BA、KT的培養(yǎng)基上,研究不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效應(yīng)。其中,2,4-D和6-BA均可以誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織,MS+2,4-D2.0 mg/L培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率可達(dá)到23.81％；加入較高濃度的2,4-D,則會(huì)抑制愈傷組織的產(chǎn)生,當(dāng)2,4-D濃度達(dá)到4.0 mg/L時(shí),無(wú)愈傷組織產(chǎn)生。在含有2,4-D與6-BA組合的培養(yǎng)基中,愈傷組織誘導(dǎo)率均有明顯上升。培養(yǎng)基MS+2,4

4、-D2.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率最高,達(dá)到92.06％,并且愈傷組織狀態(tài)良好,黃綠色較疏松,生長(zhǎng)旺盛。
　　 2.以誘導(dǎo)出的愈傷組織為材料,分別接種于附加不同濃度的6-BA、TDZ、NAA的培養(yǎng)基上,進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)。在有不同濃度的TDZ、TDZ與6-BA組合或TDZ與NAA組合的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,均未有不定芽的分化。但在含有不同濃度的6-BA或6-BA與NAA組合的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,均有不定芽的分化,其

5、中MS+6-BA1.0 mg/L培養(yǎng)基不定芽分化率最高,達(dá)到81.52％。
　　 3.在MS+6-BA1.0 mg/L培養(yǎng)基中長(zhǎng)到6-8 cm的植株,有花蕾形成,并能正常開(kāi)花,有開(kāi)花植株的瓶數(shù)可以占到總瓶數(shù)的62.5％。
　　 4.將3-4 cm高的不定芽接于不含任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS和1/2MS生根培養(yǎng)基中,兩種生根培養(yǎng)基中生根率均可達(dá)到100％,而1/2MS培養(yǎng)基中的每個(gè)植株的平均根條數(shù)可達(dá)到5.9條,高于MS培養(yǎng)基中

6、的平均根條數(shù)(4.0條)。在MS培養(yǎng)基中加入不同濃度IBA后,不定芽的生根率均有所下降,平均根條數(shù)也低于未加IBA的兩種培養(yǎng)基,誘導(dǎo)出的不定根柔嫩且細(xì)長(zhǎng)。將再生植株進(jìn)行移栽,移栽成活率可達(dá)到95％。
　　 5.以MS+2,4-D1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L和MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L培養(yǎng)基中增殖的愈傷組織、再生苗、野生華北八寶植株為材料,分別對(duì)它們進(jìn)行黃酮類化合物的提取。用紫外分光光

7、度法測(cè)定總黃酮含量,四種材料中總黃酮的含量分別為0.943％、0.935％、1.510％、1.488％。即再生苗與野生植株中的總黃酮含量較高,并且再生苗中總黃酮含量高于野生植株；兩種培養(yǎng)基中培養(yǎng)出的愈傷組織中的總黃酮含量低于野生植株。用高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行蘆丁含量的測(cè)定,蘆丁含量分別為0.364 mg/g、0.206 mg/g、1.193 mg/g、1.793mg/g。野生植株中的蘆丁含量顯著高于其它三種培養(yǎng)物中的蘆丁含量；在三種培養(yǎng)