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文檔簡介
1、陳皮(Pericarpium Citri Reticultae)是蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥果皮,作為我國傳統藥材收載于《中國藥典》。主產于廣東新會的茶枝柑是陳皮道地藥材,因其具有理氣健脾、燥濕化痰等功效而廣泛應用于食品和藥品中。本文立足于對廣陳皮中的黃酮類化合物和揮發(fā)油兩大類活性成分進行系統探討,對廣陳皮中黃酮類化合物進行分離純化和結構鑒定,對比分析不同貯藏年份、不同采收期的廣陳皮和不同柑橘皮品種中黃酮類化合物組分和含量差異及其抗
2、氧化活性差異,并研究6種黃酮單體的抗氧化活性、黃酮單體兩兩組合及有機酸、氨基酸分別與廣陳皮黃酮模擬體系之間的抗氧化協同作用。同時,對不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油的成分進行分析鑒定,并比較各揮發(fā)油的抗氧化活性和抑菌活性差異。為“陳久者良”和“道地性”提供理論支持。
主要研究結果如下:
1.廣陳皮中黃酮類化合物的分離純化和結構鑒定。比較了廣陳皮不同極性部位總黃酮含量及DPPH自由基清除效果,篩選出乙酸乙酯部總黃酮含量
3、最高且活性最強。采用液相色譜.質譜聯用技術對廣陳皮乙酸乙酯部含有的黃酮類化合物進行分析,初步鑒定出其中的8種黃酮類化合物,分別為:葡萄糖基芹菜素、橙皮苷、3’,4’,5,7,8-五甲氧基黃酮、3’,4’,5,6,7-五甲氧基黃酮、川陳皮素、4’,5,7,8-四甲氧基黃酮、3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮和橘皮素。同時,采用傳統分離純化方法對乙酸乙酯部進行分離,得到6個化合物,經理化鑒定和光譜解析(1H-NMR、13C-NMR
4、、MS)鑒定其均為黃酮類化合物,分別為:橙皮苷、川陳皮素、橘皮素、5-羥基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黃酮、4’,5,7,8-四甲氧基黃酮和3’,4’,5,7,8-五甲氧基黃酮。
2.不同貯藏年份、不同采收期廣陳皮和不同品種柑橘皮黃酮含量的比較。以分離出的6種黃酮類化合物為標準品,建立HPLC定量分析廣陳皮黃酮類化合物方法。分別分析了不同貯藏年份廣陳皮、不同采收期廣陳皮和不同品種柑橘皮中主要黃酮類化合物含量。結果表明
5、,隨貯藏時間的增加,廣陳皮中各主要黃酮類化合物總量呈減少趨勢;主要黃酮類化合物總含量和橙皮苷含量隨采收期推遲而顯著減少(p<0.05);不同品種柑橘皮主要黃酮類化合物含量差異較大。
3.不同貯藏年份、不同采收期廣陳皮和不同品種柑橘皮抗氧化活性的比較。采用DPPH法、FRAP法和ABTS法分別分析比較了不同貯藏年份、不同采收期廣陳皮以及不同品種柑橘皮的抗氧化活性,并探討黃酮類化合物含量與抗氧化性之間的相關性。結果表明,廣陳皮
6、抗氧化能力隨貯藏時間增加總體呈下降趨勢,不同貯藏年份廣陳皮的總黃酮含量與DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力呈正相關,而與FRAP鐵還原能力相關性不明顯。不同采收期廣陳皮抗氧化能力為:青皮>微紅皮>大紅皮。不同采收期廣陳皮的總黃酮含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和FRAP鐵還原能力呈正相關性。不同品種柑橘皮抗氧化能力存在一定的差異,南豐桔的抗氧化能力最強。對不同品種柑橘皮來說,其總黃酮含量和DPPH自由基清
7、除能力、ABTS自由基清除能力和FRAP鐵還原能力之間的相關性都不強,其中,總黃酮含量和DPPH自由基清除能力之間的相關系數最大,為0.5044。
4.廣陳皮黃酮類化合物體外抗氧化活性協同效應。采用ABTS法和FRAP法測定了廣陳皮中6種黃酮化合物單體的抗氧化活性,分析了單體化合物兩兩之間、5種有機酸和20種氨基酸分別與廣陳皮黃酮模擬體系之間的抗氧化協同效應。結果表明,6種黃酮類化合物中,橙皮苷的抗氧化活性最強,其次是5-
8、羥基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黃酮。單體化合物兩兩組合時,ABTS值除4’,5,7,8-四甲氧基黃酮和5-羥基-6,7,8,3’,4’-五甲氧基黃酮兩兩混合表現為協同效應外,其它4種單體化合物均表現為拮抗效應,當川陳皮素與其他化合物混合時拮抗效應較理論值顯著增強(p<0.05):FRAP值各單體均表現出顯著的協同效應(p<0.05),其中橙皮苷的協同效應最強。各有機酸和氨基酸在廣陳皮黃酮類化合物模擬體系中主要表現為拮抗效應,僅組
9、氨酸和精氨酸顯示出協同效應。
5.廣陳皮揮發(fā)油成分分析比較。比較Clevenger法和改進的Clevenger法提取廣陳皮揮發(fā)油的出油率,結果表明,采用改進的Clevenger法可顯著提高廣陳皮揮發(fā)油出油率(p<0.05)。采用GC-MS分析不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油的成分及含量變化,結果表明,不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油中共檢測出53種成分,萜烯烴類化合物26種、醇類化合物10種、醛類化合物有10種、酯類化合物3種、酮類化合物
10、2種和酚類化合物1種。萜烯烴類是揮發(fā)油的主要成分,D-檸檬烯、β-月桂烯、γ-松油烯、α-蒎烯、β-蒎烯和異松油烯是萜烯烴類中最主要的成分。D-檸檬烯的含量最高,占揮發(fā)油中揮發(fā)性物質總量的68.2%-76.1%。
從Chachi2008,Chachi2004,Chachi2001,Chachi1998,Chachi1994揮發(fā)油中分別檢測出53,48,46,47和45種揮發(fā)性物質。隨著貯藏年份的增加,揮發(fā)性物質減少。其中,
11、D-檸檬烯和β-月桂烯含量逐漸降低,而α-蒎烯和β-蒎烯含量逐漸增加。
6.不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油抗氧化活性和抑菌活性比較。采用DPPH法、ABTS法和FRAP法分析不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油的體外抗氧化活性,采用濾紙片平板擴散法和測定最小抑菌濃度來確定揮發(fā)油的抑菌能力。結果顯示,不同貯藏年份廣陳皮揮發(fā)油抗氧化活性變化較大,僅FRAP值是隨著貯藏時間的增加而增加的。廣陳皮揮發(fā)油對11種供試菌種有不同程度的抑制作用,對革蘭氏
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