版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、本文在國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目的資助下,從淋巴囊腫病毒(LCDV)免疫的牙鲆抗血清中分離提取牙鲆免疫球蛋白(Ig);篩選獲得抗牙鲆Ig的單克隆抗體,并進(jìn)行了特性分析;應(yīng)用單克隆抗體研究了牙鲆各組織中表面抗體陽性(SmIg<'+>)細(xì)胞的分布;通過檢測牙鲆血清中抗LCDV的特異性抗體水平,初步探討了應(yīng)用牙鲆Ig的單克隆抗體進(jìn)行牙鲆淋巴囊腫病的早期診斷及疫苗免疫效果評(píng)價(jià)的可行性。具體研究結(jié)果如下: (1)牙鲆Ig的分離提取。分離純化LC
2、DV,免疫健康牙鲆,制備抗血清。牙鲆抗血清經(jīng)50%飽和硫酸銨鹽析后,應(yīng)用AKTA prime蛋白質(zhì)純化系統(tǒng),通過HiTrap Igm Purification Column;HiTrap Protein A Sepharose Column和HiTrapDEAE Sepharose Fast Flow Column三種預(yù)裝層析柱純化牙鲆Ig,并進(jìn)行了分子量的初步測定。結(jié)果表明,HiTrap Igm Putification Column
3、不適合于牙鲆Ig的純化;HiTrap Protein A Sepharose Column可特異性的分離牙鲆Ig,純度高,但產(chǎn)量低;HiTrap DEAE Sepharose Fast Flow Column可分離獲得大量的牙鲆Ig,但混有少量雜蛋白。根據(jù)單抗制備的要求和特點(diǎn),最后選擇HiTrap DEAE Sepharose FastFlow Column進(jìn)行牙鲆Ig的大量純化,供單克隆抗體制備使用。通過SDS-PAGE檢測分析得出純
4、化獲得牙鲆Ig的重鏈和輕鏈分子量分別為74kDa和24kDa。 (2)抗牙鲆Ig單克隆抗體的制備及特性分析。以純化的牙鲆Ig為抗原免疫Balb/C小鼠,采用單克隆抗體技術(shù)經(jīng)細(xì)胞融合、篩選、有限稀釋法克隆共獲得了10株抗牙鲆Ig的單克隆抗體(2D8、2H1、1E1、1C12、2E6、1E7、1811、4D1、2A7、2E8)??贵w的亞級(jí)份測定結(jié)果表明:單抗2D8,1E1,1C12,2E6,2A7和2E8屬IgG亞型。單抗2H1,1
5、E7,1811和4D1屬IgM亞型。采用Western blot方法對(duì)單克隆抗體結(jié)合的抗原決定簇進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示:單抗2D8、2H1,1C12,1E7,1B11,2E6,4D1,2A7和2E8識(shí)別的抗原決定簇均位于牙鲆Ig的重鏈(74kDa)上,單抗1E1識(shí)別的抗原決定簇同時(shí)位于牙鲆Ig的重鏈(74kDa)和輕鏈(24kDa)上,單抗2E6沒有反應(yīng)條帶。通過間接免疫熒光對(duì)牙鲆淋巴細(xì)胞表面Ig進(jìn)行了檢測,結(jié)果表明所制備的10株單抗均能
6、與牙鲆淋巴細(xì)胞表面Ig反應(yīng)。 (3)牙鲆各組織中表面抗體陽性(Smlg<'+>)細(xì)胞的分布。應(yīng)用抗牙鲆Ig的單克隆抗體(2D8)通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)牙鲆各組織中的smIg<'+>細(xì)胞比例進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)各組織中的SmIg<'+>細(xì)胞的比例不同,分別為外周血細(xì)胞(40.48%),脾(17.32%)和前腎(9.67%)。 (4)牙鲆血清中抗LCDV特異性抗體水平的檢測。應(yīng)用抗牙鲆Ig的單克隆抗體(2D8)通過間接ELISA法,檢
7、測了外觀健康無癥狀、患淋巴囊腫病,具明顯腫瘤、患淋巴囊腫病,處于恢復(fù)期、免疫接種LCDV滅活疫苗四組牙鲆血清中抗LCDV的特異性抗體水平。結(jié)果表明,無外觀癥狀的牙鲆血清中特異性抗體水平很低(平均OD值為0.092),個(gè)別魚體偏高,推測其已感染LCDV,處于潛伏期,癥狀還未顯現(xiàn)出來;患淋巴囊腫病且癥狀顯現(xiàn)的牙鲆血清中特異性抗體水平升高(平均OD值為0.165);患淋巴囊腫病后處于恢復(fù)期的牙鲆抗體水平更高(平均OD值為0.231),說明處于
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 牙鲆淋巴囊腫病毒單克隆抗體的研制及應(yīng)用.pdf
- 抗豬免疫球蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf
- 鱖魚血清免疫球蛋白單克隆抗體的制備及特性分析.pdf
- 雙水相萃取分離免疫球蛋白和單克隆抗體研究.pdf
- 55114.牙鲆血清免疫球蛋白的分離分析
- 牙鲆血清免疫球蛋白純化、抗體制備及免疫組化研究.pdf
- 牙鲆淋巴囊腫病自愈機(jī)制的研究.pdf
- 7979.牙鲆多聚免疫球蛋白受體與黏膜免疫球蛋白免疫應(yīng)答動(dòng)態(tài)分析
- 淋巴囊腫病毒受體蛋白在牙鲆組織中的分布及其黏附蛋白研究.pdf
- 牙鲆淋巴囊腫病毒黏附蛋白及受體蛋白的研究.pdf
- 抗雞β2微球蛋白單克隆抗體的制備及其初步應(yīng)用.pdf
- 鼠抗人IgG單克隆抗體的研制及其在結(jié)核抗體IgG檢測中的應(yīng)用.pdf
- 中國對(duì)蝦血細(xì)胞單克隆抗體的研制及其應(yīng)用.pdf
- 抗β淀粉樣蛋白單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用.pdf
- 磺胺嘧啶單克隆抗體的制備及其在免疫學(xué)檢測中的應(yīng)用.pdf
- 單克隆免疫球蛋白檢測技術(shù)在骨髓瘤診斷中的價(jià)值評(píng)估.pdf
- 未定性的單克隆免疫球蛋白病致腎臟損害1例報(bào)道.pdf
- 沙門菌SpiC蛋白單克隆抗體的研制與初步應(yīng)用.pdf
- 56211.養(yǎng)殖牙鲆paralichthysolivaceus淋巴囊腫病的診斷技術(shù)研究
- 抗人IgGγ鏈單克隆抗體的研究及其在VEGF人源化單克隆抗體檢測中的應(yīng)用.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論