Dll4靶向納米藥物抗血管生成治療腫瘤的研究.pdf

1、腫瘤血管生成是一個多因素、多步驟的復雜病理過程，以腫瘤血管生成信號通路中的關(guān)鍵分子為靶點開發(fā)抗腫瘤藥物是目前藥物研發(fā)的熱點。現(xiàn)階段已有近十種抑制腫瘤血管生成的分子靶向藥物成功轉(zhuǎn)化應(yīng)用于癌癥的臨床治療。然而，這些分子靶向藥物臨床使用一段時間后常常出現(xiàn)低響應(yīng)和耐藥的現(xiàn)象，尋找新的抗腫瘤血管生成治療靶點顯得尤為迫切。近年來，Delta樣配體4（Delta-like ligand4，Dll4）被發(fā)現(xiàn)在腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞中高度表達，Dll4-N

2、otch信號通路在腫瘤血管生成中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用，包括調(diào)控腫瘤血管的萌芽、分支和影響血流灌注功能等。Dll4在腫瘤血管內(nèi)皮細胞表面的選擇性高表達提示其是一個潛在的抗腫瘤血管生成靶向納米藥物的新的遞送靶點。
　　本研究首次構(gòu)建了一種GD16多肽（H2N-GRCTNFHNFIYICFPD-CONH2）修飾的紫杉醇（PTX）納米遞送系統(tǒng)（GD16-PTX-NP），該納米藥物可特異性地靶向內(nèi)皮細胞表面高表達的Dll4配體。進一步以荷

3、人頭頸癌FaDu（Dll4陰性表達）腫瘤裸鼠為模型，研究該納米藥物的靶向抗血管生成治療腫瘤的作用和機制。
　　采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備裝載PTX的納米粒（PTX-NP），通過氨基末端PEG化修飾法將 GD16多肽連接到PTX-NP表面制得GD16多肽修飾的紫杉醇納米粒（GD16-PTX-NP）。透射電鏡（TEM）圖像顯示納米粒表面形態(tài)圓整，大小均一，無聚集粘附現(xiàn)象。采用Malvern Zetasizer Nano ZS納米粒度儀測

4、得GD16-PTX-NP的粒徑為189.2 nm，Zeta電位為-14.2 mv。HPLC測得GD16-PTX-NP的載藥量為3.9％，包封率為35.3%。納米粒在PBS中的釋放表現(xiàn)為先突釋和后緩釋的雙相釋放過程，在大鼠體內(nèi)藥動學實驗中顯示出良好的長循環(huán)特性。采用高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)考察了人臍靜脈內(nèi)細胞（HUVEC）對香豆素6標記的納米粒的攝取情況。GD16多肽修飾的納米?？赏ㄟ^與HUVEC表面高表達的Dll4配體特異性結(jié)合促進納米粒內(nèi)吞

5、進入血管內(nèi)皮細胞，游離多肽、低溫、菲律賓菌素和氧化苯砷等可顯著抑制內(nèi)皮細胞對納米粒的攝取。GD16多肽的靶向性可顯著增加GD16-PTX-NP對HUVEC增殖、遷移、小管形成和運動性的抑制作用。GD16-PTX-NP可有效地抑制裸鼠體內(nèi)Matrigel種植體的微血管密度。采用Xenogen小動物成像技術(shù)觀察到DiR標記的GD16-NP可在腫瘤組織中靶向性高蓄積，并且該效應(yīng)可被游離GD16多肽阻斷。這一結(jié)果提示GD16多肽修飾可顯著增強納

6、米粒對腫瘤組織的靶向性。激光共聚焦顯微鏡圖片顯示香豆素6標記的GD16-PTX-NP可準確靶向腫瘤血管內(nèi)皮細胞并進一步誘導其凋亡。以荷FaDu腫瘤裸鼠為模型，考察了GD16-PTX-NP體內(nèi)抗血管生成治療腫瘤的活性。GD16-PTX-NP能夠通過減少腫瘤組織中的微血管密度和誘導腫瘤細胞的凋亡，有效地延緩腫瘤體積的生長，并且無體重減輕等明顯毒副作用。
　　本研究首次構(gòu)建了靶向腫瘤血管Dll4配體的納米藥物（GD16-PTX-NP），