IL-9血清水平及基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SystemicLupusErythematosus,SLE)是一種典型的自身免疫性疾病,常可累及多系統(tǒng)多器官,臨床表現(xiàn)復(fù)雜。SLE好發(fā)于青年女性,尤其是20～40歲的育齡期婦女。目前其發(fā)病機(jī)制尚不清楚,一般認(rèn)為由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用,導(dǎo)致T細(xì)胞、B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的功能失調(diào)及大量自身抗體產(chǎn)物的形成。到目前為止,SLE仍無特效的治療方法,只有深入研究其發(fā)病機(jī)制,才有希望尋找到更為有效的治療策略

2、。
　　近年來有研究發(fā)現(xiàn),由異常輔助T(Th)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子與SLE發(fā)病機(jī)制有關(guān),傳統(tǒng)的CD4+效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞被劃分為Thl和Th2兩大類,但新近的研究顯示,根據(jù)細(xì)胞的發(fā)育、功能及分泌細(xì)胞因子的作用不同,CD4+效應(yīng)性淋巴細(xì)胞應(yīng)分為Thl、Th2、Treg和Th17四大亞群。IL-9最初被認(rèn)為是一種T淋巴細(xì)胞生長因子。最近的相關(guān)文獻(xiàn)指出,Thl、Th2、Treg和Th17均是IL-9的細(xì)胞來源,此外,肥大細(xì)胞和NTK也能產(chǎn)生

3、IL-9。
　　KOICHI等的研究顯示,在日本人群中,血清IL-9的表達(dá)水平在系統(tǒng)性硬化病患者中明顯升高,且并發(fā)SLE的系統(tǒng)性硬化癥患者的表達(dá)水平也是明顯升高的。此外,Zhu等在中國上海人群中做了IL-3、IL-4、IL-5、IL-9和IL-13的基因單核苷酸多態(tài)性與Graves'病的關(guān)聯(lián)性研究的結(jié)果顯示,IL-9(rs1859430、rs2069868)的兩個(gè)位點(diǎn)與Graves'病無顯著相關(guān)。目前尚無IL-9基因單核苷酸多態(tài)性

4、與SLE易感性關(guān)聯(lián)的研究。
　　基于上述內(nèi)容,本課題擬采用病例對照研究,利用ELISA方法、TaqMan技術(shù),檢測SLE患者及正常對照者IL-9血清水平及基因單核苷酸多態(tài)性,探討其與SLE發(fā)病之間的關(guān)聯(lián)性。本課題的完成將有助于闡明IL-9在SLE發(fā)病中的作用,進(jìn)一步揭示SLE的發(fā)病機(jī)制,并為尋找新的SLE治療靶點(diǎn)提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究一 IL-9血清水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的：
　　比較SLE患

5、者和正常對照,狼瘡腎炎患者和非狼瘡腎炎患者,疾病活動(dòng)期患者和非疾病活動(dòng)期患者之間血清IL-9表達(dá)水平的差異,分析血清IL-9水平與SLE患者實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)、臨床特征之間的關(guān)聯(lián)性,探討其在SLE發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　病例來自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和安徽省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的SLE患者(均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)),共86例。對照來自安徽醫(yī)科大學(xué)教職工和研究生健康志愿者,共85例。對照與病例

6、按照性別、年齡匹配。調(diào)查問卷收集研究對象的一般情況和臨床資料,并進(jìn)行SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(systemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex,SLEDAI)評分。獲得研究對象知情同意后,抽取其外周靜脈血。采用ELISA試劑盒檢測血清IL-9水平,比較SLE患者和正常對照,狼瘡腎炎患者和非狼瘡腎炎患者,疾病活動(dòng)期患者和非疾病活動(dòng)期患者之間血清IL-9表達(dá)水平的差異。應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分

7、析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1)不同組別間血清IL-9水平的比較SLE患者組與正常對照組的血清IL-9濃度分別為:(31.30±16.93)pg/mL、(40.65±17.96)pg/mL,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001);SLE合并腎炎組與未合并腎炎組的血清IL-9濃度分別為:(35.45±16.91)pg/mL、(28.01±16.36)pg/mL,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041);活動(dòng)期與非活動(dòng)期

8、SLE患者血清IL-9濃度分別為:(31.06±16.69)pg/mL、(31.79±17.81)pg/mL,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.851)。
　　(2)血清IL-9水平與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)的關(guān)系SLE患者血清IL-9濃度與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)無相關(guān)性(r=0.003,P=0.978)。
　　(3)血清IL-9水平與臨床特征和實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)的關(guān)聯(lián)SLE患者血清IL-9水平與患者的口腔潰瘍和腎損害存在顯著關(guān)聯(lián),口腔潰瘍的患者

9、血清IL-9水平降低(P=0.029),腎損害的患者血清IL-9水平升高(P=0.041);SLE患者血清IL-9水平與抗ds-DNA抗體、抗SSB抗體存在顯著關(guān)聯(lián),在抗ds-DNA抗體、抗SSB抗體的SLE患者中血清IL-9水平顯著升高(P=0.037;P=0.005)。
　　結(jié)論：
　　本研究提示SLE患者組與正常對照組、LN組與非LN組的血清IL-9水平表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而活動(dòng)期與非活動(dòng)期SLE患者血清IL-9水

10、平表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清IL-9水平與SLE患者的部分臨床特征、實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)之間存在關(guān)聯(lián)。
　　研究二 IL-9基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的：
　　比較SLE患者和正常對照者IL-9基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)(rs1859430、rs2069868)的等位基因和基因型頻率的差異,探討IL-9基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：
　　病例來自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附

11、屬醫(yī)院和安徽省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的門診及住院SLE患者(均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn))。對照來自安徽醫(yī)科大學(xué)教職工和研究生健康志愿者、健康獻(xiàn)血員。采用自行設(shè)計(jì)的問卷,調(diào)查并登記研究對象的一般情況和臨床資料,在獲得知情同意的情況下,采集SLE患者及正常對照的外周靜脈血。應(yīng)用TaqMan技術(shù)進(jìn)行基因分型。
　　采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,χ2檢驗(yàn)或確切概率法用于比較兩組間等位基因頻率、基因型頻率的分布差異

12、。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1)rs1859430位點(diǎn)多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究SLE患者組共有562例,GG、AA、AG的基因型頻率分別為93.4％、0.5%和6.1%,對照組共有629例,其基因型頻率分別為94.1%、0.2%和5.7%;SLE患者組G和A等位基因頻率為96.4%和3.6%,對照組則為97.0%和3.0%。兩組基因型頻率的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AAvs.GG:OR=0.296,95%CI0

13、.031-2.851,P=0.537;AGvs.GG:OR=0.939,95%CI0.579-1.522,P=0.798;AA+AGvs.GG:OR=0.887,95%CI0.554-1.420,P=0.617),等位基因頻率的分布差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Avs.G:OR=0.844,95%CI0.537-1.326,P=0.461)。
　　狼瘡腎炎(lupusnephritis,LN)患者的基因型分布狀況為:G和A等位基因頻率為96

14、.6%和3.4%;GG、AA、AG的基因型頻率分別為93.6%、0.4%和6.0%。非LN患者組中:G和A等位基因頻率為96.3%和3.7%;GG、AA、AG的基因型頻率分別為93.3%、0.6%和6.1%。兩組的基因型頻率的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AAvs.GG:OR=1.431,95%CI0.129-15.885,P=1.000;AGvs.GG:OR=1.022,95%CI0.505-2.069,P=0.951;AA+AGvs.GG:

15、OR=1.050,95%CI0.532-2.069,P=0.889),等位基因頻率的分布差異也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Avs.G:OR=1.073,95%CI0.563-2.043,P=0.831)。
　　(2)rs2069868位點(diǎn)多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究SLE患者組共有660例,GG、AA、AG的基因型頻率分別為73.5%、2.0%和24.5%,對照組共有648例,其基因型頻率分別為74.7%、1.4%和23.9%;SLE患者組A和

16、G等位基因頻率為14.2%和85.8%,對照組則為13.3%和86.7%。兩組基因型頻率的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AAvs.GG:OR=0.694,95%CI0.294-1.638,P=0.402;AGvs.GG:OR=0.959,95%CI0.744-1.236,P=0.745;AA+AGvs.GG:OR=0.939,95%CI0.733-1.203,P=0.619),等位基因頻率的分布差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Avs.G:OR=0.928,

17、95%CI0.743-1.159,P=0.508)。
　　LN患者的基因型分布狀況為:G和A等位基因頻率為86.3%和13.7%;GG、AA、AG的基因型頻率分別為74.2%、1.6%和24.2%。非LN患者組中:G和A等位基因頻率為85.5%和14.5%;GG、AA、AG的基因型頻率分別為73.1%、2.2%和24.7%?；蛐皖l率分布差異也不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AAvs.GG:OR=1.340,95%CI0.407-4.413,P

18、=0.848;AGvs.GG:OR=1.039,95%CI0.719-1.504,P=0.837;AA+AGvs.GG:OR=1.058,95%CI0.739-1.516,P=0.757),兩組等位基因的頻率分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Avs.G:OR=1.069,95%CI0.775-1.475,P=0.683)。
　　結(jié)論：
　　未發(fā)現(xiàn)IL-9基因的rs1859430和rs2069868位點(diǎn)的多態(tài)性與漢族人群的易感性有關(guān),可